生产菌种的来源研究报告.ppt

用含0.2%果胶为唯一碳源的培养基平板，对含微生物样品进行分离，待菌落长成后，加入0.2%刚果红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落周围便会出现绛红色水解圈。 如 筛选果胶酶产生菌 刚果红对纤维素染色 3、抑菌圈法 ? 常用于抗生素产生菌的分离筛选 据估计，筛选1万个菌株才能得到1株有用的抗生素产生菌；因此，设计一个准确、快速的筛选模型十分重要。 抑菌圈法是常用的初筛方法 工具菌采用抗生素的敏感菌 （金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌等） 若被检菌能分泌某些抑制菌生长的物质，如抗生素等，便会在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈 常用于分离筛选氨基酸、核苷酸和维生素的产生菌。工具菌是一些相对应的营养缺陷型菌株； 待检菌涂布于高浓度的工具菌并缺少工具菌所需营养物的平板上培养，若某株待检菌能合成工具菌所需的营养物，在该菌株的菌落周围便会形成一个混浊的生长圈； 嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的琼脂混合倒平板，在其上涂布待测菌样品保温培养，周围出现生长圈的菌落即为嘌呤产生菌。 4、生长圈法 七、目前微生物富集方法的研究进展 分子生物学的实验手段，在微生物鉴别及特定目标产物 的筛选方面发挥了着越来越重要的作用。如:16SRNA同 源性分析，基因序列分析及DNA/DNA杂交技术等 目前土壤中能够培养的微生物不到总数的1%。微生物的 多样性及资源的开发仍然是今后若干年的研究重点。 2002,陈文新（科学院院士） In contrast to this traditional approach, modern molecular biology techniques allow for DNA library expression screening, which also enables access to enzymes of `nonculturable‘ organisms. By this strategy, for instance, the company Diversa (San Diego, CA, USA) identised 120 unique esterases/lipases from only 16% of the total DNA obtained from an alkaline soil sample. 宏基因组分析 FEMS Microbiology Reviews 26 (2002) 73～81 * 赖氨酸的生物合成途径及其调控机制 天冬氨酸激酶受赖氨酸和苏氨酸的协同反馈抑制。 失去了合成高丝氨酸的能力时，中间产物天冬氨酸半醛全部转入赖氨酸合成； 协同反馈抑制：在分支代谢途径中，几种末端产物同时都过量，才对途径中的第一个酶具有抑制作用。若某一末端产物单独过量则对途径中的第一个酶无抑制作用。 总结三、食品酶制剂生产有关的微生物 食用酶都要经过一系列研究的毒理试验，目前已同意使用的仅仅少数微生物生产的食用酶。 α-淀粉酶：黑曲霉、米曲霉、米根霉、枯草牙孢杆菌 和地衣牙孢杆菌 水解淀粉制造饴糖、葡萄糖和糖浆等； 糊精、啤酒、黄酒、酒精、酱油、醋、果汁、味精、面包的生产等； 蔬菜的加工等； 第二节 菌种来源 微生物工程工业生产水平 的三个决定要素: 生产菌种的性能 获得优良的生产菌种是实现高水平微生物工程工业生产的第一环节 发酵和提取工艺条件 生产设备 （一）微生物菌种的来源 一般通过以下几个途径收集菌种、采集样品和分离筛选： 1、直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买（生产）； 2、从大自然中采集样品分离（科研）； 3、从一些发酵制品中分离筛选目的菌株（科研、生产）。 育种三个方向 野生菌转向变异菌； 自然选用转向代谢育种； 诱发基因突变转向基因重组的定向育种； 一、菌种分离与筛选工作程序 发酵工业菌种，最初都是从自然界中分离筛选出来的。 分离与筛选菌种的具体做法一般分4个步骤： 样品采集 增殖培养 纯种分离 生产性能测定 （二）微生物工业菌种的分离 调查研究（包括资料查阅） 试验方案设计 采样 第一次增殖培养 第一次平板分离 第二次增殖培养 第二次平板分离 增殖条件探索 第一次原种斜面（保存） 第二次原种斜面 初筛（1株1瓶） 定量或半定量测定 筛 选 工 作 程 序 第二次原种斜面（保存） 第三次平板分离 第三次原种斜面 第四次平板分离 不纯 第四次原种斜面 再复筛 初步工艺条件摸索 较优菌株 1株3-5瓶 保藏及进一步做生产性能试验或作为育种的出发菌株 某些必要试验和毒性试验 第四次菌种保藏（保存） 第三次菌种保藏（保