生物：第二部分《实验六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》(浙科版选修1)研究报告.ppt

* 实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 背景：酶在应用过程中存在的问题 ①天然酶对强酸、强碱、高温等敏感，易失活 ②难回收，提高了生产成本 ③反应后酶混在产物中，影响产品质量 将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 固定化酶 基础知识：酶的固定化技术 酶固定化的方法： a、吸附法： 将酶吸附到固体吸附剂表面的方法， 如：活性碳、多孔玻璃、石英砂等 固体吸附剂 酶 d、包埋法： 将酶包裹在凝胶交联后的格子中 c、交联法： b、共价偶联法 酶的某些基团（如氨基末端、羧基末端）与载体共价结合。 利用试剂与酶之间发生分子交联 来把酶固定化的方法。 a、吸附法： 实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 实验目的： 1. 掌握α-淀粉酶的固定化 2. 检测固定化α-淀粉酶的效果 实验设备和材料：38页—39页 固定化酶柱 气门心 夹子 5ml注射器 1.α-淀粉酶的固定化 吸附 5mgα-淀粉酶+4ml蒸馏水+5g石英砂，搅拌30min 装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中 用10倍柱体积的蒸馏水洗涤除去游离淀粉酶（1mL/min) 装柱 洗柱 如何证明淀粉酶已全部被固定? 蒸馏水 洗柱流出的水+淀粉，保温几分钟后+KI-I2 变蓝说明水中无游离的淀粉酶，已全部固定 固定化装置—反应柱 淀粉 α-淀粉酶 糊精 β-淀粉酶 葡萄糖 糖化淀粉酶 麦芽糖 遇碘显蓝色 红色 实验原理： 2、淀粉水解的检测 一定浓度的淀粉流经固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，流出物用KI-I2溶液测试呈红色。 枯草杆菌的α-淀粉酶： 最适温度为50-75℃；最适PH为5.5-7.5 溶解淀粉 50mg淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀 过柱 使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱，在流出5ml淀粉后接收0.5ml流出液。 检测 加入1-2滴KI-I2溶液，观察颜色变化。用水稀释1倍后再观察颜色。 保存及再次使用 10倍柱体积蒸馏水洗涤此柱，放置4℃冰箱保存，几天后取出重复实验。 实验步骤： 让淀粉和固定的α-淀粉酶充分反应 2.3实验结果 1 2 3 4 1、水+1~2滴KI-I2溶液 、淀粉液+1~2滴KI-I2溶液 、流出液+1~2滴KI-I2溶液 、稀释1倍的流出液+1~2滴KI-I2溶液 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的 易与产物分离、反复利用 固定化酶 容易失活；很难回收，提高生产成本；酶会混在产物中，可能影响产品质量 催化效率高，低耗能、低污染等 直接使用酶 不足 优点 类型 直接使用酶和固定化酶的优缺点 有些生物无性别，如大部分植物（雌雄同株）； 有性别的生物大部分由性染色体决定性别 XY型（雌性为同型的XX，雄性为异型的XY) ZW型（雄性为同型的ZZ，雌性为异型的ZW) 有些生物X比Y大 ，有些生物Y比X大 果蝇 9.