实验2分离以尿素为氮源的微生物2研究报告.ppt

实验2 分离以尿素为氮源的微生物 一.实验原理 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： (酸性)黄色 红色 (变色范围 pH6.4-8.2) 二.实验目的 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应) 三.实验步骤 ２.倒平板 ３.制备一定浓度梯度的细菌悬液 １g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０-2稀释液，依次制备１０-3、１０-4、１０-5的土壤稀释液。 （无菌，0.1ml，玻璃刮刀） 配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml LB培养基 蛋白胨： 0.25g 酵母提取液： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组 选择培养基 实验组 为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？ 接种 取0.1ml菌悬液 涂布分离 涂布分离 37℃倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养 1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂 思考题： 2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。