4细菌感染的病原学诊断、细菌分类与命名课稿.ppt

细菌感染的病原学诊断 （二）无菌采集，避免污染 （三）不同病菌、不同疾病、采集不同标本 如: 伤寒 第一周 取血 第二、三周 取大、小便、骨髓 （四）根据检测项目的要求，应采集足量 （五）安全采集：避免标本污染；防止传播和自身感染 （六）标本应注明：姓名、年龄、性别、采集日期、临床诊断、检测项目 二、标本处理原则 　　1、床旁接种 　　2、立即送检：一般在2小时内 　　3、保温（低温、嗜温）送检 　　4、保护送检：避免打翻、破流、污染、漏气。 　　5、安全送检：烈性传染病标本，专人送检。 三、标本的检查方法 1、直接显微镜检测 2、病原体的分离培养和鉴定 3、病原体特异性抗原检测 4、血清学检测（特异性抗体检测） 5、病原体核酸检测 第二节 细菌的形态学检查 细菌的形态学检查是细菌检验中最主要的基本方法之一。 工具——必备的基本工具(显微镜)。 方法——不染色标本检查和染色标本检查。 暗视野检查 用于检查活菌、螺旋体及其动力 缺点是不能观察结构，不能鉴别染色性 （二）染色标本检查法 1、常用的染料有 (1)碱性染料：显色离子带正电，易与带负电的病原体结合，如碱性复红、结晶紫、美兰。 (2)酸性染料：显色离子带负电，易与带正电的病原体结合，如伊红、刚果红。 (3)复合染料：又称中性染料，是酸、碱性染料的复合物，如伊红美兰、姬姆萨染料、荧光染料。 特殊染色法: 1、鞭毛染色法: 2、荚膜染色法: 3、芽胞染色法: ★　种　类： 细菌的分离培养和鉴定 1．平板划线分离法 2．斜面接种法 3．液体接种法 培养方法： ★　需氧培养法： 将已接种细菌的液体、半固体、固体培养基置37℃孵育18~24h观察生长现象。 ★　二氧化碳培养法 包括 1、二氧化碳孵箱 （能自动调节二氧化碳 的含量和温度） 例：抽气换气法： 将已接种的平板放入真空干燥缸或厌氧罐中，放入催化剂钯粒和指示剂美蓝，先用真空泵抽成负压99.99kPa，再充入无氧氮气，反复三次，最后充入80%N2、10%H2、10%CO2的混合气体，如罐内无氧，则指示剂美蓝变为无色美白。 每次观察标本应重新抽气换气 葡萄糖氧化-发酵(O/F)试验 原理:细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。 氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。 细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧酵解的，称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。 不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。 利用此试验可以区分细菌的代谢类型。 方法：将待检菌同时穿刺接种于两支Hugh-Leifson培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm。将培养基于35℃培养48h或更长。 β-半乳糖苷酶（ONPG）试验 某些细菌具有β-半乳糖苷酶 七叶苷试验 原理：胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌和D群链球菌都能在含有胆盐的培养基中生长并水解七叶苷，生成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe2+反应形成黑色沉淀，使培养基变黑色。 方法：将被检菌接种胆汁-七叶苷琼脂培养基，35℃孵育18~24h。 结果判断、解释和报告：细菌生长，且培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。 此试验是鉴定肠球菌的重要试验，但不能区分D群中的肠球菌与非肠球菌。 明胶液化试验 明胶 苯丙氨酸脱氨酶试验 苯丙氨酸 氨基酸脱羧酶试验 氨基酸 2、反向间接血凝试验 原理：将已知抗血清直接吸附或化学偶联的方法结合于红细胞表面，再与待测标本混合，若待测标本中有相应的细菌，则发生红细胞凝集。 优点：该试验敏感性高、反应快、结果易于观察常用于一些细菌及某些细菌毒素的测定。 3、乳胶凝集试验 原理：将已知抗血清吸附于聚苯乙烯颗粒上，与相应抗原产生肉眼可见的乳胶颗粒凝集现象。用于细菌及一些激素的测定。 优点：因操作简单，反应快速而被临床广泛应用。 4、协同凝集试验 原理：绝大多数金葡菌细胞壁的表面存在一种蛋白,葡萄球菌A蛋白（SPA）,他能与除IgG3外的IgG的Fc段发生非特异性结合后，Fab段仍可与特异性抗原结合。当金葡菌与已知的IgG连接时，则成为抗体致敏的颗粒载体，与相应细菌或抗原接触后，出现肉眼可见的凝集现象。 优点：该方法快速、简便、敏感性高，结果易于观察，广泛应用与细菌的快速鉴定和分型，有助于一些传染病的快速诊断 二、新检测方法标记技术 免疫印迹法 （Western blot. WB） 　　是凝胶电泳与固相免疫技术相结合的一种新型免疫生化技术。