微生物检测技术--金黄色葡萄球菌检测研究报告.ppt

食品的微生物学检验致病菌 主要内容 金黄色葡萄球菌（GB4789.10-2010） 大肠杆菌（GB 4789.38-2012） 沙门氏菌（GB 4789.4—2010） 副溶血性弧菌（GB 4789.7—2013 ） 1、生物学特性1.1形态与染色 金黄色葡萄球菌无芽孢，无鞭毛，大多数无荚膜 革兰氏染色阳性； 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 1.2 培养特征 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧，在好氧条件下生长最好； 大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适温度30-37℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最适pH为6-7）； 耐盐性强，在含7～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。 溶血：红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。 溶血素是细菌分泌的一种毒性因子 细菌的溶血现象 根据细菌对红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型及现象： α溶血:产生溶血素，不完全性溶血，在血琼脂平皿上菌落周围有1～2mm，较窄半透明的草绿色溶血环。 β溶血: 呈完全性溶血，在血平皿上菌落周围有2～4mm宽、界限分明、无色透明的溶血环。 γ溶血:不产生溶血素，在血琼脂平皿上的菌落周围无溶血环。 可产生卵磷脂酶，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。 1.3 生化反应 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。 分解甘露醇，产酸。 2、致病性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，为条件致病菌。可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 葡萄球菌皮肤感染 菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： 　　a.溶血素：外毒素，分α、β、γ多种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； 　　b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； 　　c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； 　　d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； 　　e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。 2、致病性 ++++当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。肠毒素可耐受100度煮沸30min而不被破坏。人摄食该污染产品后2-3h便可出现中毒症状。其引起的食物中毒典型症状为呕吐和腹泻。 3、流行病学 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。 4、GB 4789.10—2010食品安全国家标准食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 1 范围 本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的检验方法。 本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验； 第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数； 第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。 检测步骤---增菌 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的氯化钠），用含7.5%氯化钠肉汤 检测步骤---增菌 或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤（污染严重时） 检测步骤 ---分离 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。 血平板 Baird－Parker琼脂平板(BP平板) 胰蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 酵母膏 1.0 g 丙酮酸钠 10.0 g 甘氨酸 12.0 g 氯化锂 5.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 950 mL 卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL 检测步骤---分离 BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供