微生物实验(第三节课)研究报告.ppt

芽胞染色法: 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状)。芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 高氏一号平板：培养放线菌 取样品3.53g 加蒸馏水至100mL 加热溶解，分装斜面，剩下的高压倒平板。 （共配液体100mL）倒3个平板（每个平板倒20mL，共60mL）剩下的制备斜面培养基（每管5mL）。 马丁氏培养基：培养霉菌用 取样品4.17g 加蒸馏水至100mL 加热溶解，分装斜面，剩下的高压倒平板。 （共配液体100ml）倒3个平板（每个平板倒20mL，共60mL）剩下的制备斜面培养基（每管5mL）。 实验七 水和食品中微生物的检测 一、目的要求 了解食品卫生微生物学的重要性及其原理 学会水和食品中细菌菌落总数的测定方法和平板活菌计数法 3. 学会水和食品中大肠菌群数的测定方法 二、基本原理 水和食品中的微生物数量主要考虑到的是细菌特别是病原菌的数量。这些细菌主要来源于土壤、垃圾、粪便等，尤其是后者。若饮用水、酿造水和食品中发现有大肠群细菌，就有可能存在肠道病原菌，可能会危害人们的健康，因此，进行食品卫生的微生物学检验是十分重要的。 一般情况下，主要是测定水和食品中细菌菌落总数和大肠菌群数。细菌菌落总数是指水中或食品检样经处理后，在一定条件培养后，所得1 g或1 mL检样中所含细菌菌落的总数，其主要作为判定水和食品被污染程度的标志。大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌、常将其作为人畜粪便污染的标志。水和食品中大肠菌群数是以每100 mL（g）检样中大肠菌群最可能数（MPN）表示的。 三、实验材料 水样的采取： 池水，河水或湖水应距水面10-15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱保存,时间不要超过六小时。 2. 其他实验材料参考实验讲义P47 四、实验内容 （一）、食品中细菌菌落总数和大肠菌群数的检测 食品中细菌总数：用平板菌落计数法测定（即菌种分离纯化技术的平板混合法） 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品的一个单细胞.统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中2-3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成的单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 四、实验内容 2．食品中大肠菌群数: 用多管发酵法测定.包括初(步)发酵试验,平板分离和复发酵试验三个部分(略) 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基,并倒置一杜氏发酵小管.乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气.为便于观察细菌产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂,细菌产酸后,培养基即由原来的紫色变为黄色.溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。 图7-1 食品检样稀释及倾注平板示意图 四、实验内容 操作图示： 四、实验内容 （二）、准备下次实验培养基（P30-31） (1)肉汤琼脂培养基：100 mL，装在250 mL三角瓶(加2%琼脂) (2)肉汤上层培养基：50 mL，分装8小试管，每支5 mL（1/4试管） （加0.8%琼脂） (3)蛋白胨水：30 mL分装5支小试管,每支4.5 mL (4)吸管：1 mL6支 (5)培养皿：12皿，包成两包，6个/包 （三）、观察上次实验结果记录 五、实验报告 1．食品微生物学检测结果的报告(格式)： 微生物学检测结果的报告 送检单位:×××有限公司 送检