微生物学实验一研究报告.ppt

微生物学实验 微生物实验课基本安排 必修课，36学时、2个学分； 采用模块化教学形式(3个模块，12个实验，11次课完成)； 操作考试(占50％)＋实验论文（共三篇，每个模块写一篇）(占50％)； 微生物实验课要求（一） 不允许无故旷课、早退和迟到； 穿工作服； 食品、饮料和饮用水等禁止带入实验室； 注意水、电和火安全； 正确使用化学试剂； 正确操作各种仪器。 微生物实验课要求（二） 每位同学做完实验后及时清理桌面，物品归位，清洁台面。 每次实验结束后，每排的4位同学留下值日，协助保持实验室清洁。 微生物学实验模块 环境微生物多样性观察（含4个单元实验） 功能微生物的筛选、鉴定、培养条件优化和菌种选育（含5个单元实验） 微生物检测（含3个单元实验） 实验一 环境微生物采集与分离 模块一：环境微生物多样性观察 一、实验目的 1.了解环境与微生物的关系及其多样性； 2.学习环境微生物（土壤、水体、人体等）采样的基本方法； 3.初步掌握观察微生物的实验方法； 4.了解光学显微镜显微观察的基本操作和油镜头的使用方法； 5.了解并熟悉微生物的稀释涂布分离方法与技术； 6.树立严格的无菌意识和掌握正确的无菌操作方法。 二、实验内容与方法 （一）天然环境微生物样品的采集、分离、培养 1.环境微生物样品采集（分组采集） 空气中微生物采集：牛肉膏蛋白胨平板和马铃薯培养基，打开皿盖在空气中暴露5min后盖上皿盖（全班室外和室内各一块）。 土壤微生物采集：五点对角法取样，混匀，称取1 g土壤放入含9 ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），振荡分散。 水体微生物采集与稀释：用灭菌三角瓶分别取污水和水库水约100 ml。 2. 样品稀释 土壤样品的稀释：称量2 g土壤放入含18 ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），混匀后用移液枪和枪头在离心管中进行10倍比逐级稀释成10-2,10-3的梯度样品。 水体微生物样品的稀释：将湖水和池塘水, 分别稀释成10-1,10-2, 10-3等系列。 注意事项： 土壤加入水后已稀释了10倍! 逐级稀释的样品要混匀！ 0.1ml 样品＋0.9ml 无菌水 注意无菌操作问题！ 为什么？ 使用灭菌器材取水和土样； 使用酒精灯灼烧实验器材； 使用酒精灯火焰制造局部无菌环境，甚至使用超净工作台。 3.样品的平板稀释涂布 取100μl稀释液于固体培养基平板表面中央，用无菌的玻璃涂棒将样品液滴均匀涂布分散在平板表面。 土壤样品：10-2,10-3样液（单号组10-2，双号组10-3） 1块 牛肉膏蛋白胨培养基 1块 高氏一号培养基 1块 马铃薯培养基 水体样品：湖水:10-1，10-2, 池塘水:10-2,10-3样液（单号组库水，双号组污水） 2块 牛肉膏蛋白胨培养基 Spread-Plate Technique 涂布操作 4. 培养 将平板倒置放入培养箱内进行培养。 牛肉膏蛋白胨培养基： 30℃ 24 h 下周每个班提前一天课前半小时转接斜面, 培养 高氏一号培养基： 28℃ 1 week 马铃薯培养基上： 28℃ 1 week (三）口腔微生物的观察 1.取样：用无菌棉签在口腔内反复擦拭几遍，然后将棉签涂布于载玻片上(事先放1/3滴水)。 2.制片(单染色法) 涂片→固定→沙黄染色2分钟→水洗至无色流液→吸去残留水→酒精灯干燥。 3.显微镜油镜观察：按照低倍-高倍-油镜的顺序进行观察。 单染色 光学显微镜的基本结构 1. 目镜（又称为接目镜或眼透镜）2. 物镜转换器3. 物镜4. 粗调旋钮5. 微调旋钮6. 载物台7. 光源8. 光阑和聚光器9. 推进器（又称为推片器） 油镜镜头的使用 光源亮度适中，光圈75%左右，聚光镜调节至顶，干燥样品上滴加少许香柏油，用100×镜头对准光路，用显微镜粗调将镜头与样品表面相接，然后用细调往与粗调相反方向调节直至出现清晰的影像。 油镜清洗：擦镜纸擦去镜头上的油，擦镜纸沾取二甲苯擦拭镜头，干净擦镜纸擦去残留的二甲苯。 口腔上皮细胞 上皮细胞细胞核 上皮细胞细胞器 口腔微生物 三、实验记录 显微镜观察结果可用手机拍照! 请确保油镜头擦拭干净！