高校毛细管电泳课稿.ppt

高效毛细管电泳 一、概述 outline 二、基本装置 instrument 三、基本原理basic principles 四、主要分离模式 Main separating form 五、毛细管电泳样品收集 和浓缩技术 六、毛细管电泳的应用 Applicatio of HPCE 七、毛细管电泳法的优缺点与展望 Advantage and development of HPCE 一.概述 CE是近年来发展较快的一种高效﹑快速的分离技术，在体内药物分析中得到广泛应用。CE具有分离模式多﹑样品用量少﹑适用范围广﹑成本低等特点，是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。 一.概述 高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE） 又称毛细管电泳（CapillaryElectrophoresis，CE） 指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离 通道，依据各组分样品之间淌度和（或） 分配行为上的差异而实现分离的一种液相 分离技术。 二.基本装置 二.基本装置 三.基本原理 三.基本原理 HPCE中的电渗现象与电渗流 HPCE中电渗流的大小与方向 HPCE中电渗流的方向 HPCE中电渗流的流形 HPCE中电渗流的作用 HPCE中电渗流的作用 （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 在HPCE中，控制电渗流非常重要。 三.基本原理3.影响电渗流的因素 (3). 电解质溶液性质的影响 (5). 添加剂的影响 (4). 温度的影响 HPCE中的参数与关系式  parameters and relation in HPCE 3.分离度 四.主要分离模式 毛细管区带电泳（CZE） 胶束电动毛细管色谱（MECC或MEKC或CEMC） 毛细管等速电泳（CITP） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（CIEF） 毛细管电色谱（CEC） 微乳毛细管电泳 非水毛细管电泳（NACE）等。 其中以CZE、MECC应用最为广泛。 四.主要分离模式 CZE，CGE，CITP及CIEF的分析对象为可解离的物质或带电荷的物质，适用于分离生物碱类﹑有机酸类﹑氨基酸类﹑核酸类﹑多肽及蛋白质类﹑黄酮及其苷类、香豆素类等化合物。在蛋白质和多肽的鉴别分析中CZE常用来测定肽谱（蛋白质的一级结构的指纹图谱），CGE常用于测定蛋白质的等电点和蛋白质的富集。MECC除上述物质外，还能分析中性分子，因此，它适用于各类物质的分析。 四.主要分离模式 最近，又出现了毛细管阵列电泳(CAE)和毛细管电泳免疫分析(CEIA)、芯片毛细管电泳(CC)、亲和毛细管电泳(ACE)、毛细管电泳仪与其他仪器的联用CE-MS,CE-NMR等新技术,所有这些发展都将使CE技术日臻完善。 一.毛细管区带电泳（CZE） CZE又称毛细管自由电泳，是CE中最基本﹑应用最普遍的一种模式。前述CE的基本原理即是CZE的基本原理。CZE是根据在电场E中有不同的迁移速度来分离的。 二.胶束电动毛细管色谱（MECC） 在胶束动电毛细管色谱法的体系中, 存在着以胶束形式存在的准固定相和作为载体的液体流动相, 溶质在两相之间分配, 并且由于其在准固定相和流动相中的分配系数不同差异而在不同的时间流出, 从而使得不同性质的物质产生分离。因此，这相当于构成一种不需要的固体支持物来固定液体固定相的液-液分配色谱。它的作用力是在电场作用下的电渗流和电泳。 MECC常用的表面活性剂 阴离子型：癸基硫酸钠﹑十二烷基硫酸钠（SDS）﹑十四烷基硫酸钠（STS）﹑十二烷基磺酸钠； 阳离子型：十二烷基三甲基氯化铵（DTCA）﹑十二烷基三甲基溴化铵（DTAB）﹑十六烷基三甲基氯化铵（CTAC）﹑十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）； MECC常用的表面活性剂 非离子型表面活性剂：辛基葡萄糖苷﹑3-[3-（氯化酰胺基苯基）二甲基胺基]-1-丙基磺酸酯（CHAPS）； 手性表面活性剂：胆酸﹑毛地黄皂苷﹑十二烷基-N-L-缬氨酸钠﹑环糊精。 其中SDS最为常用，还可以将几种胶束剂混合起来以提高MECC的选择性和分离度 三.毛细管凝胶电泳（CGE） CGE是在毛细管中装入凝胶作为支持物进行电泳，应用最多的介质是交联和非交联聚丙烯酰胺凝胶（P