Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程.doc

目的 （Purpose）： 规范Agilent100型高效液相的使用和维护，确保仪器正常运转。 范围 （Scope）： 适用于Agilent1200型高效液相的使用和维护。 职责（Responsibility）： 使用和维护。 定义（Definition） Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动性不吸收光，则吸光度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。物理上测得物质的透光率，然后取负对数得到吸光度。 4.3示差折光检测器（）利用纯流动相和含有组分的洗脱液二者折光率之间的差别进行检验。由于折光率随温度变化，检测器要求有一恒温小空间，使温度稳定，最好能控制在±0.001℃以内。依据反射定律，在玻璃-液体界面，反射光的程度与入射角和玻璃与液体的折光率有关。折光率改变时，反射光的强度也发生变化，在光电管中产生的信号被放大和记录下来。安全注意事项（Safety Precaution） 5.1流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 5.2在流动相配制好后，一定要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。 5.3如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。 程序 （Procedure）：Yp6nkL}Di1 ?6.1 仪器组成及电源 =gzpY.eW1 ?6.1.1仪器组成本仪器由（G1311A）、标准自动进样器（G1329A）、柱温箱（G1316A）、VWD检测器（G1314B）、示差检测器（G1362A）、脱气系统（G1322A），各部件电源插头。 UV| LNS ?.2 操作前准备 }1Cu5V1 ?.2.1紫外检测器（VWD）6.2.1.1 打开计算机，进入WindowsXP画面。 6.2.1.2 打开1200LC各Instrument 1 online”、“Instrument 1 offline”图标，分别进入“online”界面和“offline”界面。 6.2.1.3在“offline”界面下单击 “Method and Run Control”进入该界面，单击“针”图标，在“Set up Injector”项下，选择“Standard Injection”，在“Injection Volume”输入进样体积，单击“OK”完成。单击“泵”图标，在“Set up Pump”项下，输入流速、洗脱时间，点击“Insert”编辑洗脱梯度，单击“泵”图标，在“Control”项下，单击“On”或“Off”打开或关掉泵。单击“柱温箱”图标，编辑柱温箱温度。单击“VWD”图标，在“Set up VWD Signal”输入检测波长，单击“VWD”图标，在“Control”项下，单击“On”或“Off”打开或关掉氘灯，完成方法编辑后单击“File”项下选择“Save”或“Save as”保存方法或另存方法。 6.2.1.4 在 “online”界面下，单击“Methods”图标调用方法，单击个模块图标下方的“图标”，依次打开各模块，这时各模块图标均显示黄色，待各模块正常运行后，各模块图标均显示绿色，如出现异常会显示红色。 6.2.1.5在“online”界面，在“Sequence”项下，单击“Sequence Parameters”，在该界面下输入保存路径及文件名，单击“OK”，完成样品信息的编辑。在“Sequence”项下，单击“Sequence Table”，在该界面下，在“Vial”下输入样品瓶位置，在“Method Name”调用方法，在“Inj/Vial”输入进针次数，在“Sample Name”下可输入样品名称或批号，也可以不输，编辑完成后单击“OK”，完成序列编辑。 6.2.2示差折光检测器（D） 6.2..2 打开1200LC各Instrument 1 online”、“Instrument 1 offline”图标，分别进入“online”界面和“offline”界面。 注：若上次使用的是示差折光检测器，则可以直接进入online界面，若上次使用的是别的检测器，则按以下步骤操作：在online弹出的窗口右边的复选框中选择上次使用的检测器图标，点击窗口中央的向左箭头，将其移除，然后在左边的复选框中选择需要使用示差检测器，点击窗口中央的向右箭头，将其添加，点击ok继续进入online。 6.2.2.3在“offline”界面下单击 “Method and Run Control”进入该界面，单击“针”图标，在“Set up Injector”项下，选择“Standard