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SDS-PAGE所有详细试剂配方
SDS
30%聚丙烯酰胺溶液30%(w/v)Acrylamide
【组分浓度】
各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml 29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g 1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺将克丙烯酰胺和克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml水中,溶解,补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌,储于棕色瓶,4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0,因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月,隔几个月须重新配制。如有沉淀,可以过滤。4℃避光保存丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能含有少量未聚合材料。名称 用量 备注 Tris 12.1 去离子水 80ml 浓盐酸 ml (36%的浓盐酸)预实验已确定 去离子水 加入去离子水定容至100ml后,室温保存 室温保存。(pH8.8)名称 用量 备注 Tris 去离子水 80ml 浓盐酸 去离子水 加入去离子水定容至100ml后,室温保存 十二烷基硫酸钠SDS溶液10%(w/v)SDS
【组分浓度】10%(w/v)SDS
名称 用量 备注 去离子水 加入去离子水定容至100ml后,室温保存 保存条件:????4保存。注意事项:????易燃,有腐蚀性,请注意防护。????易挥发,使用后请盖紧瓶盖。????为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。保存条件:????4保存。注意事项:????易燃,有腐蚀性,请注意防护。????易挥发,使用后请盖紧瓶盖。????为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套用量 备注 0.1g 去离子水 ml 现配现用 【配制方法】
称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管,加1mL去离子水吹打溶解,4℃保存
【保存条件】
4℃保存
【注意事项】
10%过硫酸铵溶液在4℃保存时,可使用2周左右,超过期限会失去催化作用
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液?5×Tris-Glycine buffer (SDS电泳缓冲液)
【组分浓度】
各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 1000ml 500ml 0.125M Tris 15.1g 1.25M glycine(甘氨酸gTris,g甘氨酸,gSDS,用蒸馏水溶解至1000ml,得0.mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释倍。?5×SDS加样缓冲液?5×SDSLoading Buffer
【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8);
10%(W/V)SDS;
0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝);
50%(V/V) 甘油;
5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)
各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 5ml 3ml 1MTris-HCL(pH6.8) 1.25ml SDS 0.5g BPB(溴酚蓝) 25mg 甘油 2.5ml (0.5mL/份)分装,室温保存,使用前加25μL 2-ME/小份,保存一个月左右。 β-巯基乙醇(2-ME) 0.25ml 【配制方法】
量取1.25mL 1MTris-HCL(pH6.8),0.5g SDS,25mg BPB,2.5mL甘油,置于10mL塑料离心管中,加去离子水溶解后,定容至5mL,小份(0.5mL/份)分装,于室温保存。使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。
【保存条件】
-20℃保存,至少一年有效。
【注意事项】
SDS蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇,有轻微刺激性气味,必须完全溶解后再使用。
摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法
TEMED原液直接使用
考马斯亮蓝R-250染色液
【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R-250,25%(v/v)异丙醇,10%(v/v)冰醋酸
各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 1000ml 400ml 备注 考马斯亮蓝R-250 1.0g 0.4g 异丙醇 250ml 100ml 搅拌溶解,可用甲醇替代 冰醋酸 100ml 40ml 搅拌均匀 去离子水 650ml 260ml 搅拌均匀,滤纸除去颗粒物,室
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