保健食品中水溶性多糖测定方法改进.doc

[作者简介] 冯家力( 1967 - ) , 男, 学士, 主任技师, 主要从事食 品安全因子和功能因子检测研究。 保健食品中水溶性多糖测定方法改进 冯家力, 潘振球, 郭周武, 刘志光 (湖南省疾病预防控制中心, 长沙 410005) [ 关键词] 水溶性多糖; 保健食品; 比色; 改进 [ 中图分类号] R15515 [文献标识码] C [文章编号] 1004- 8685( 2008) 11- 2395- 02 水溶性多糖是指分子量大于10 kD 且能溶于水的聚合糖, 大多具有明显的抗肿瘤活性和免疫调节功效, 它广泛存在于植物(如黄芪、枸杞等)、菌类( 灵芝、虫草等) 和藻类( 如海带、螺旋藻等)中, 并作为许多保健食品的功效因子使用, 其含量测定方法有比色法、液相色谱法、电化学分析法和生物传感器法等[ 1~ 7] , 由于比色法简单易行, 是目前最常用的方法, 通常采用水提取, 80% 乙醇沉淀和洗涤, 铜试剂选择沉淀, 苯酚- 硫酸显色, 用500 kD葡聚糖作标准进行测定。该方法用在多糖提取物的测定时基本是成功的, 然而由于保健食品中往往同时加入多种多糖, 用80%乙醇沉淀不了40 kD 以下的多糖, 同时由于保健食品中基质复杂, 沉淀物黏粘包裹, 直接用80%乙醇不能洗涤沉淀内部。因此用此方法测定时, 既不能沉淀这些多糖, 也不能洗去干扰, 测定的是一些干扰成分和夹杂在黏粘沉淀物里的少量多糖, 使得结果波动很大, 对有些样品的测定结果甚至可差近二个数量级。本文通过对方法的改进, 较好地解决了这一问题。 1 材料与方法 11 1 仪器和试剂 分光光度计; 5000 rm p离心机; 涡旋混匀器; 恒温水浴锅;2. 5 m o l/L NaOH 溶液: 100 g NaOH 加蒸馏水稀释至1 L, 加入固体无水硫酸钠至饱和; 铜贮存液: 称取310 g CuSO4. 5H20,3010 g 柠檬酸钠加水溶解至1 L; 铜应用溶液: 取铜贮存液50 m ,l 加水50 m l混匀后加入无水硫酸钠12.5 g, 临用新配;洗涤液: 取水50 m ,l 加入10 m l铜应用溶液, 10 m l 2.5 mo l/LNaOH 溶液, 混匀; 11 8 m ol/L H 2 SO4: 取100 m l浓硫酸用水稀释至1 L; 20 g /L 苯酚溶液: 称取21 0 g 苯酚, 加水溶解并稀释至100 ml 混匀备用; 葡聚糖标准对照品: 分子量分别为10、40、500 kD(国药集团化学试剂有限公司); 葡聚糖标准液: 分别准确称取干燥后的葡聚糖100 m g, 用水定容至100 m ,l 葡聚糖标准浓度为110 mg /m ;l 葡聚糖标准应用液: 吸取葡聚糖标准液10 m ,l 用水稀释10倍, 葡聚糖终浓度为01 1 m g /m l。 11 2 试验方法 11 211 样品提取 准确称取样品5 g, 加水100 m ,l 沸水浴加热2 h, 冷却至室温, 定容至100 m ,l 混匀后过滤, 弃初滤液, 收 集余下滤液。11 212 沉淀高分子物质 准确吸取上述滤液110 m ,l 置于25 m l离心管中, 加无水乙醇201 0 m ,l 涡旋混匀, 以3000 rpm离心5 m in, 弃上清液。 11213 洗涤高分子物质 向上述离心管中加入11 0 m l水溶 解残渣, 再加入2010 m l无水乙醇, 涡旋混匀, 以3000 rpm 离 心5 m in, 弃上清液, 反复3次, 残渣供沉淀葡聚糖之用。 11214 沉淀葡聚糖 将上述残渣用21 0 m l水溶解, 加入 215 mo l/L N aOH 溶液210 m ,l Cu应用溶液21 0 m ,l 沸水浴中 煮沸2 m im, 冷却后以3000 rpm 离心5 m in, 弃上清液, 残渣用 洗涤液洗涤3次, 残渣供测定葡聚糖之用。 11215 测定葡聚糖 上述残渣用21 0 m l 11 8 m o l/L H2 SO4 溶 解, 用水定容至10 m l。 准确吸取210 m ,l 置于25 m l比色管 中, 加入11 0 m l苯酚溶液, 混匀, 用推进式移液器迅速加入 10 m l浓硫酸, 每管分别计时, 用硫酸遇水放出的热加热 2 m in, 立即置水浴冷却, 用分光光度计在485 nm 波长处进行 比色测定。 11216 标准曲线制备 精密吸取葡聚糖标准应用液0110 ~ 2100 m l(相当于葡聚糖01 01~ 0120 mg), 加水至210 m ,l按测定 葡聚糖的方法进行测定, 绘制葡聚糖浓度对吸光度标准曲线。 2 结果与讨论 211 沉淀高分子物质方法改进 通常用80%乙醇进行沉淀, 我们分别以分子量为10、40、 500 k