大孔吸附树脂分离纯化罗汉果皂苷的新方法.doc

大孔吸附树脂分离纯化罗汉果皂甙的新方法 大孔树脂的预处理??? 将新大孔树脂于95% 乙醇溶液中浸洗8 h 后, 用蒸馏水清洗至无醇味, 再用5% 氢氧化钠浸泡4 h, 用蒸馏水洗至pH 值中性后, 接着用5% 盐酸浸泡4 h, 再用蒸馏水洗至pH 中性。湿法装柱, 一次完成, 自然沉降。大孔树脂堆积密度的测定??? 取一标准玻璃层析柱(26 mm ×500 mm ) 将湿大孔树脂堆至100 mL , 取出, 称重。按下式计算大孔树脂的堆积密度:Q= m/v??? 式中　m —— 湿树脂质量, g; v —— 树脂体积,mL ;Q—— 堆积密度, g/mL。饱和吸附量的测定??? 称取1. 000 g 湿树脂于锥形瓶中, 加入50 mL 0. 8mg/m L 的罗汉果皂甙水提取物, 封口, 于室温下震荡吸附24 h。分别于吸附前后测定溶液中罗汉果皂甙的浓度, 按下式计算饱和吸附量:Q 0 = (C0 - C1) ×V/W??? 式中　Q 0—— 饱和吸附量,mg/g; C0—— 吸附前浓度,mg?mL ; C1—— 吸附后浓度,mg/mL ; V —— 溶液体积,mL ; W —— 大孔树脂湿重, g。罗汉果皂甙静态吸附试验??? 称取1. 000 g 湿大孔树脂置于锥形瓶中, 加入50mL 0. 8 m g?mL 的罗汉果皂甙水提取物, 封口, 每隔20m in 从上清液中取样0. 5 mL , 测定其吸光度, 然后按下式计算吸附量:??? Q = (C0 - C1) ×V/W??? 以吸附量为纵坐标, 作用时间为横坐标绘制静态吸附曲线。罗汉果皂甙静态解吸试验??? 称取0. 500 g 湿大孔树脂3 份, 各加入15 mL 0. 8m g?mL 的罗汉果皂甙提取物水溶液, 于室温下吸附24h 后, 将充分吸附了罗汉果皂甙水溶液的树脂进行过滤, 去除水液, 再将其置于锥形瓶中, 各加入15mL 95%乙醇溶液, 封口, 分别于20℃, 40℃, 60℃下进行解吸, 每隔3 m in 测定解吸液中罗汉果皂甙的浓度, 并绘制解吸曲线, 同时根据吸附量计算解吸率。罗汉果皂甙的动态吸附试验??? 准确吸取20 mL (约17. 93 g)D101 大孔树脂装柱,以浓度为4 m g?m L 的罗汉果皂甙水提取物溶液上柱,流速2 mL /m in, 分部收集流出液, 定时测定流出液中的罗汉果皂甙浓度, 然后以洗脱液体积为横坐标, 流出液中罗汉果皂甙含量为纵坐标绘制动态吸附曲线。吸附达到饱和后, 计算饱和动态吸附量。洗脱剂及其浓度的选择??? 取一定量的罗汉果皂甙提取物水溶液, 上柱, 先用蒸馏水洗脱至无色后, 依次用50mL 10%～ 80% 浓度的乙醇溶液进行洗脱, 收集不同浓度的乙醇洗脱液并定容至50 mL , 取其中3 mL 洗脱液稀释至10 mL 后测定其罗汉果皂甙的浓度, 以确定最佳的洗脱剂浓度。上样液最适pH 值的选择??? 将罗汉果皂甙水提物溶液(pH 值6. 0) 用氢氧化钠溶液调至不同的pH 值, 上柱, 依次用50 mL 同样pH 值的水溶液, 蒸馏水及60% 的乙醇水溶液进行洗脱, 收集60% 的乙醇洗脱液(pH 值6.0) , 定容至50mL , 取3mL洗脱液稀释至10 mL , 测定罗汉果皂甙的浓度, 确定其最佳pH 值。罗汉果皂甙V , 11-O -罗汉果皂甙V 及罗汉果皂甙IV 的高效液相分析??? 对照品溶液的配制: 准确称取罗汉果皂甙V , 11-O-罗汉果皂甙V 及罗汉果皂甙IV 对照品0. 005 g, 用23%乙腈水溶液溶解并定容至10 mL , 配制成混合对照品溶液。??? 样品溶液的配制: 准确称取各样品0. 010 g, 用23%乙腈溶解并定容至10mL , 配制成1. 0m g?m L 的样品溶液。??? 色谱条件: Hypersil ODS C18 柱(250 mm ×4. 6mm , 5μm, 大连伊利特科学仪器公司) ; 流动相: 乙腈:水= 23∶77 (v/v) ; 流速: 0. 5 mL /m in; 柱温: 30℃; 检测波长: 210 nm; 进样量: 10. 0μL。以保留时间定性, 根据峰面积计算样品的含量。结果与分析??? 树脂的吸附特性??? 通过对大孔树脂D 101,D 3520,D 2400,N K-9 的初步筛选发现, 大孔树脂D 101对罗汉果皂甙的吸附、解吸效果较好, 因此本实验以大孔树脂D 101为柱材料, 研究其对罗汉果皂甙的分离纯化效果。结果表明, 大孔树脂D 101的堆积密度为0. 8965 g/m L。对罗汉果皂甙的饱和吸附量为25. 45m g/g , 饱和吸附率为8