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实验二 抗体制备和凝集反应 (2) 沉淀反应 1. 原理: 试管凝集 Test 2 沉淀反应 ——琼脂扩散实验 方法： 注意： * * 实验二 抗体制备和凝集反应 (2) 沉淀反应 抗原抗体反应 直接凝集反应 玻片凝集 定性 半定量 1) 玻片凝集反应: 已知抗原 + 未知抗体 凝集团块 混浊 ? 2) 试管凝集反应： 定量抗原 + 系列稀释抗体 不同程度的凝集反应 YES NO 确定抗体的滴度 抗体滴度： 能产生明显凝集反应的、抗体最高稀释度的倒数。 实验材料： 灭活的伤寒菌液 (7×108/ml), 待测血清 2. 方法： 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 0.5 弃掉 1 2 3 4 5 0.1 6 0.9 生理盐水(ml) 待测血清 对照管 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml ① ② ③ ④ 灭活的伤寒菌液 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 抗体稀释度 彻底混匀 56℃, 1h 3. 注意事项 标记试管 正确使用滴管 彻底混匀 温度: 56℃ 记录时间 轻拿试管，观察结果，首先观察对照管 4. 预期结果 + 很小的凝集颗粒 混浊 - 无凝集现象 与对照相同 ++ 小、部分凝集块 中等混浊 +++ 大多凝集管底 轻度混浊 ++++ 大的凝集块 清亮 凝集程度 沉淀 上清 管底沉淀 凝集程度 最高稀释比例 待测血清的滴度 经典抗原抗体反应的一种。 分类: 琼脂扩散 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 免疫电泳 沉淀反应: 沉淀线或沉淀环 可溶性抗原 相应抗体 + 琼脂扩散实验: 可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。 分类: 单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量实验 双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 —— 定性实验 Ⅰ 单向琼脂扩散实验: 抗原浓度 沉淀环直径平方 Ag Ag Ag Ag 琼脂中含抗体 1:10 1:20 1:40 1:80 Ag 未知 Ⅱ 双向琼脂扩散实验: 1. 微波炉中彻底融化1% 琼脂 2. 取5ml 琼脂均匀铺在载玻片上 凝固 3. 在琼脂板上打5个孔 4. 在孔中加入相应样品 Ab Ag1 Ag1 Ag2 Ag2 5. 37℃, 孵育24h 琼脂板一定平整、光滑 (无气泡). 琼脂不可过厚 孔中液体不可过满 Test 3 再次免疫 2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC） 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 制备绵羊红细胞溶液20%、25%、30%、40% 取0.1ml 皮下注射免疫小鼠 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 强调： 1.滴管的使用方法，每组发4支，其中2支为公用，用来取生理盐水和菌液，用完后插入相应试剂管中。 2.一定要混匀，用滴管混匀时，吸时不要用力过猛，以免将液体吸入橡皮头内，吹时不可将液体完全吹净，以免产生过多气泡，影响定量。 3.按顺序加样，不可颠倒 4.伤寒菌液尽量避免洒出。 5.各组记好时间 6.取出时，不可晃动试管，轻拿轻放。 示教： 检测人IgG含量