大肠埃希氏菌检验.ppt

知识目标： 理解大肠埃希氏菌的生物学特性。 了解大肠埃希氏菌的致病性。 掌握大肠埃希氏菌标准检验方法。 大肠埃希氏菌 简介：大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。 大肠埃希氏菌作为正常菌群存在于人和动物肠道中，并广泛存在于自然界，是条件致病菌。大肠埃希氏菌的某些菌株对人有致病性。人和动物的带菌是传播本菌引起食物中毒的重要原因。 根据致病机理分为： 肠产毒素性大肠埃希氏菌（Enterotoxigenic E.coli，ETEC），引起腹泻腹痛型胃肠炎。 肠侵袭性大肠埃希氏菌（Enteroinvasive E.coli，EIEC），引起的胃肠炎酷似痢疾。 肠致病性大肠埃希氏菌（Enteropathogenic E.coli，EPEC），主要引起新生儿的腹泻。 肠出血性大肠菌埃希氏（Entero-hemorrhagic E.coli,EHEC），引起出血性大肠炎。 肠粘附性大肠埃希氏菌（Enteroadhesive E.coli,EAEC），也可引起腹泻，但对其发病机理与血清型尚不了解。 一、生物学特性 形态及染色特性：革兰氏阴性杆菌；不形成荚膜；多有周身鞭毛，能运动。有时对碱性染料着色较好，但有时菌体两端着色较浓。呈两极浓染。 麦康凯琼脂上生长情况：形成红色菌落。 伊红美蓝琼脂上生长情况：产生黑色带金属闪光的菌落。 血平板：一些致病性菌株在绵羊血平板上呈β溶血。 SS琼脂上生长情况：一般不生长或生长较差，生长者呈红色。 抵抗力 对游离氯敏感，0.2㎎/L即可杀死该菌，因此常用漂白粉对自来水消毒。 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。 毒素特征 有些大肠杆菌可以产生肠毒素，分为两种 不耐热（LT）肠毒素 耐热（ST）肠毒素 二、致病性 肠道内感染 肠道外感染 三、检验方法 大肠埃希氏菌计数应按《食品安全国家标准 食品微生物学检验》GB4789.38-2012中有关内容进行。 Thank You! 专业教学资源库 动物检疫检验技术 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 大肠埃希氏菌检验 大肠埃希氏菌检验 主讲人：王福红 动物性食品微生物检验 能力目标： 会制备大肠埃希氏菌检验用培养基。 会对大肠埃希氏菌进行检验。 培养特性：需氧或兼性厌氧，在15℃～45℃范围内均可生长，最适生长温度为37℃，最适pH值为7.2～7.4。 普通琼脂培养基上生长情况：在普通琼脂培养基上即可生长良好，形成菌落与沙门氏菌相似，大肠杆菌菌落对光观察可见荧光。 肉汤培养基生长情况：肉汤培养18-24小时，呈均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。 生化特征 发酵葡萄糖、乳糖、不同菌株对蔗糖的利用不一致。 不产生硫化氢 - 。 尿素酶试验 - 。 氰化钾（KCN） - 。 色氨酸（靛基质）+。 MR（甲基红）+ ；V-P -。 枸椽酸盐 -。 抗原特性 O抗原：菌体抗原 H抗原：鞭毛抗原 荚膜抗原： 与沙门氏菌的Vi抗原相似，可阻止O抗原与相应的抗体发生凝集，并且可逃避吞噬细胞的吞噬。根据对热的敏感性分为A、B、L三种。 检验程序 复发酵试验 EMB分离培养 纯培养 初发酵试验 结果 报告 鉴定 实验器材 培养基、试剂 LST发酵管、EC发酵管、EMB平板、 蛋白胨水、MR、V-P、西蒙氏枸橼 酸钠、营养琼脂、靛基质试剂等 实验器材 设备、器材 无菌工作台、酒精灯、灭菌吸管、 接种环、稀释液、拍击式均质器、 恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、 天平、电炉等 检验程序 无菌取25 g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，拍击式均质器拍打1 min～2 min制成1:10的样品匀液。 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管中。 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。 （一）样品处理 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1 ℃培养24h±h，观察小倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养48h±2h。产气者进行复发酵试验。如所有LST肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希