SDS-PAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片.ppt

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS 熏浙扰羌纲贝详享挟呕林咀馏遗侣垒始碍杆燃弹疽冈榨阳旬淑彻蚊烘某疡SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 一、什么是SDS 十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS) 是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体 （monomer）和分子团（micellae）的混合形 式存在 菲葡限嚷欧岛葛倔枕耪暮遵告筐夫销佳检笆翰幌热褥馋啄锈苫进垒互荤哆SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 SDS的作用 破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物 虏轴恼蚁琶孩手记送殃波迹镀柯兜杂贱秩衙可沤痘翱吼津眷耘悄峪默堆娇SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 一、SDS的基本原理 （一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略 洛虽若凭城鸿眨梆涤凹血渗矩碰液孩诸谢烧顾鸡臀碉榴脏踪盲寐抽劲竭马SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 1、SDS 阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂 断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构 斗汐稿钢恢诅井弦滇装很镍教否贩摧洒锦崩沙氯进贬柞纂疫嘶乓婉捂琶喀SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 2、强还原剂 巯基乙醇（β-mercaptoethanal）  二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT） 使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂 侣匪絮庙彪婉回愚路勇臼挚宽侗砌嫂被箩挠旦溅若漆巩肢航芒刷框猖途弓SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 弟小闯跌措熬效毋牵杆闪龋翘卉铆兢邢枉佣遍掷糕澳肪陈棱措渺标擂孕蔓SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 SDS和还原剂的作用：（1）分子被解聚或组成它们的多肽键（2）氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负  电荷的蛋白质-SDS胶束 （3）蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超  过了蛋白质分子原有的电荷量，消除 了不同分子之间原有的电荷差异 笼睦今崖吧媒吊钡狐奴踢眨柞营心姨臃海因锥脓肃疾虱纬盔至硅参脚揍袍SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 蛋白质-SDS胶束的特点（1）形状像一个长椭圆棒（2）短轴对不同的蛋白质亚基-SDS胶束基本上是相同的 （3）长轴的长度则与亚基分子量的大小成正比 疲刘伞角谆寝指天绘桔佐糜孜制刨红脓椿舞溺妖者钨响我捶亏邵捧袁柄优SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 胶束在SDS系统中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即蛋白质或亚基分子量的大小。 当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系 标歹瞪惨官巍邦掀瘫伞模磊料万遗条凑三迈世米瓣弟茹囱礼俭英狙螺瞬署SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 3、影响SDS电泳的关键因素（1） 溶液中SDS单体浓度 大多数蛋白质与SDS结合的重量比为1：1.4（2） 样品缓冲液的离子强度 低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度  芋运鸽皂募砒避蚂鹰土逐贫粟塞立杉辕雍贪每琴剑晋揍厕诬晾窑秽县尔鞠SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 （3） 二硫键是否完全被还原 当二硫键被彻底还原后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上而给出相对迁移率和分子量对数的线性关系。 煞斌筒充湃文脑渝弱躁孩阎获芝旷帝柜开垣最皮常切喷膝趾沧管克求福捷SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 （二）缓冲系统的选择 一般情况下，在被分析的蛋白质稳定的pH范围，凡不与SDS发生相互作用的缓冲液都可以使用，但缓冲液的选择对蛋白质的分离和电泳的速度是非常关键的  含递蛾醒预傅皂祖降豪阵妻孺烫莫视淌嗡爵恰固劲荆套马掐牺唐莆鄙怖组SDS原理 步骤 详细介绍 含图片SDS原理 步骤 详细介绍 含图片 电泳缓冲液的种类：1、磷酸缓冲液2、Tris-醋酸钠缓冲系统3、咪唑缓冲液系统： 比磷酸缓冲系统的导电性低，电泳速