生物技术药物的药代动力学特点及检测.pptVIP

SC生长激素（0.4 IU/kg）后食蟹猴(n=7-8/组)的血清生长激素浓度 普通ELISA 、高灵敏度ELISA（additional 增色放大系统）和化学发光ELISA 法(luminol/过氧化氢底物)灵敏度和线性范围比较 (From 汤仲明，2002） 放射免疫测定法和免疫放射定量法 抗原，标记抗原，抗体 灵敏度高，尤其免疫放射定量法 需同位素 常用于激素浓度测定 同位素标记示踪法 在目标蛋白多肽分子上标记同位素,从而鉴别目标蛋白多肽与内源性蛋白多肽 该法需将目标蛋白多肽进行同位素标记,标记方法有外标法(化学联接法) 和内标法(掺入法) 2 种； 外标法：将标记物如125 I 通过化学方法偶联至完整蛋白中如蛋白中酪氨酸或赖氨酸等，常用的化学方法有氯胺T 或Iodogen法 内标法：可用即将标记以3H ,14C 或35S 等同位素的氨基酸加入生长细胞或合成体系中,从而获得含同位素的蛋白多肽分子,但因其操作复杂而少用； 标记后蛋白多肽表征： 比放射性 放射性纯度 标记的蛋白多肽的生物活性。 同位素标记示踪法 优点 灵敏度高 简便直观 检测迅速 尤其适用于蛋白肽类药物的组织分布 缺点 同位素标记 一般不能进行人体药物动力学研究; 可能引起药物的生物活性及代谢行为发生变化； 由于蛋白多肽进入体内会被降解代谢,或标记氨基酸的生物再利用，或与其它蛋白质结合,总的放射性不能代表药物动力学过程 同位素标记示踪法与其他分析手段联合应用 SDS三氯醋酸(TCA) 沉淀法 HPLC 法 生物检定法 利用被测蛋白多肽类药物某种特异生物反应,通过剂量(浓度)－效应曲线对目标蛋白多肽进行定量测定的一种分析方法； 分为离体分析法和在体分析法； 离体分析法通常采用细胞体外培养技术,以细胞的增殖、分化或细胞毒性为基础,以细胞数目的增减等为量效指标，如水蛭素(hirudin) 凝血酶时间测定； 在体分析法则利用蛋白多肽类药物在整体动物中引起的特异生物学反应，如胰岛素降底小鼠血糖。 Pharmacokinetic analyses of ADI–SS PEG and ADI–SS PEG measured by enzyme and ELISA assays 生物检定法缺点 缺乏特异性,不能定量其代谢产物,不能区分内源性和外源性细胞因子; 灵敏度差,为启动生物过程细胞因子的浓度必须在阈水平以上,低于阈水平的样品将不能被定量,从而降低了方法的灵敏度; 耗时,为完成分析需时间较长,往往达数日或数周； 重复性差,不同实验室的结果有很大差异性,致不同单位之间的比较难以进行; Pharmacokinetics？ 延长半衰期常用方法 聚乙二醇化(Pegylation) 白蛋白融合(albumin fusion) 可溶性受体融合(soluble receptor fusion) 糖链化(glycosylation) Pharmacokinetic profiles for interferon (IFN)-α2a and 40 kDa polyethylene glycol (PEG)–IFN-α IV or SC albutropin（growth hormone–albumin fusion）or GH in rats and monkeys 优秀精品课件文档资料 生物技术药物的药代动力学特点及检测 广州蓝韵医药研究有限公司 专注于中药新药临床前研究，保健品研发 Cumulative Revenues of Selected Biotechnology Companies (Amgen, Genentech, Chiron, Genzyme and Biogen) Selected Blockbuster Protein Pharmaceuticals 生物技术药物 重组蛋白多肽类 单克隆抗体及其片断 寡核苷酸 疫苗制剂 基因治疗药物（核酸制剂） 干细胞药物？ 蛋白肽类药物药代动力学 吸收 分布 代谢与排泄 蛋白肽类药物吸收 小分子多肽：被动吸收 大分子多肽： 水溶性：细胞间隙 脂溶性：膜脂扩散 胞饮 淋巴系统吸收：po干扰素；高度脂溶性？ 影响蛋白肽类药物吸收因素 药物稳定性； 细胞渗透性：MW1000，鼻粘膜》肠粘膜 Correlation between MW and the cumulative recovery of sc rINF alpha-2a, cytochrome c, inulin and 5-fluoro-2 -deoxyuridine (FUDR) in the efferent lymph in sheep 蛋白肽类药物吸收 非肠道给药( Parenteral Route)：IVM＝SC＝IP鼻腔肺直肠回肠阴道颊口服 鼻腔给药