HIV检测技术课件.pptVIP

HIV检测技术 艾滋病实验诊断技术 HIV抗体测定 抗原测定 核酸测定 病毒分离 CD4淋巴细胞计数 HIV抗体检测的目的和要点 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。 初筛实验室设备条件 独立实验室用房，建筑设备和仪器要符合要求II级生物安全实验室 酶标仪，洗板机，精确移夜管，专用冰箱，离心机，水浴箱，温箱等 消毒和污染处理设施 安全防护设施 艾滋病检测方法的意义 HIV抗体筛查检测 HIV/AIDS的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋病诊断依据，需将该标本送确证实验室进行确证。 HIV抗体确认检测（免疫印迹试验） HIV/AIDS诊断的唯一依据 艾滋病确认实验室负责 HIV核酸检测 辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。 感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。 病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。 指导治疗方案及疗效测定。 预测疾病进程 。 抗体检测 根据检测HIV感染后产生的HIV抗体的间接指标而 发展起来的血清学诊断技术，分为初筛试验和确认试 验。 初筛试验 用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结果可能会有假阳性，不能发抗体阳性报告 确认试验 确定检测对象是否有HIV抗体，可发抗体阳性报告 酶联免疫试验 ( ELISA ) 最早用于检测血清中HIV抗体的有效筛检方法 很高的敏感性和特异性 根据检测方法，可分成4类间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法 HIV抗体检测试剂根据其抗原的来源和检测方式可分为四代 筛查试验 筛查试剂 经国家食品药品监督管理局注册批准 在试剂有效期内 酶联免疫试剂应批批检合格 临床质量评估敏感性和特异性高 第一代ELISA试剂 包被抗原：全病毒裂解抗原 窗口期：6-8星期 优点：灵敏度高，可检出各种抗体 缺点：制备麻烦，成本高，假阳性 1985年，FDA批准第一个HIV抗体筛选试剂 第二代ELISA试剂 包被抗原：重组抗原、合成多肽 窗口期：4-5星期 优点：重组抗原可消除HLA（人类白细胞抗原）所致的抗体假阳性，生产成本低，不使用HIV病毒颗粒，较为安全，敏感性特异性较高 缺点：仍有一定的假阳性 1990年，FDA批准第一个重组抗原筛选试剂 第三代ELISA试剂 包被抗原：重组抗原加合成多肽 合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高 窗口期：3星期左右 优点：可检测所有不同种类的抗体，增加了试剂的敏感性和特异性 1994年发展了双抗原夹心法，酶标物由抗人IgG改变为特异性HIV抗原 第四代ELISA试剂 包被物：重组或多肽抗原+重组抗体 窗口期：2星期左右 优点：同时检测HIV抗原抗体，缩短窗 口期 注意：抗原检测敏感性低于单独抗原试 剂(50~70pg/ml,5~10pg/ml) 1998年第四代试剂首次上市 HIV抗体试剂盒进展 代次 抗原 方法 检测时间 1 全病毒 间接 2个月 2 重组或多肽 间接 3-4 周 3 重组+多肽 夹心 2-3 周 4 抗原+抗体 夹心 2周左右 Closing the window 筛查样品 HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。 唾液检测试剂 在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可以同时检测HIV－1/HIV