实验2-凝集反应-ELISA(双抗原夹心法).ppt

* 免 疫 学 实 验 课贵阳医学院免疫学教研室 * 1、ABO血型鉴定--玻片凝集反应（1份/1人） 2、乙型肝炎病毒表面抗体检测--ELISA法(1份/1人） 实 验 内 容 * （一）玻片凝集反应 已知抗血清与未知颗粒性抗原置于清洁玻片上，在一定的条件下，若两者相对应，则会发生凝集。本方法主要用于抗原的定性分析，如菌种鉴定、ABO血型鉴定等。 ABO血型系统 * * ABO血型鉴定步骤 红细胞悬液的制备（用于血型鉴定及ELISA实验） 1. 取EP管1支，加入5滴生理盐水 2. 消毒耳垂或手指皮肤 3. 用采血针采1-2滴血，加入盛有生理盐水的EP管中混匀 4. 2000rpm，离心3min 5. 取红细胞悬液用于ABO血型鉴定 6. 取已加有抗A血清与抗B血清载玻片1张，分别加入待测抗原各1滴，并用牙签混匀。 7. 置室温5 分钟左右观察结果。 取上清用于ELISA实验 ABO血型鉴定的判断 B型 抗A型标准血清 抗B型标准血清 抗A型标准血清 抗B型标准血清 A型 抗A型标准血清 抗B型标准血清 O型 抗A型标准血清 抗B型标准血清 AB型 示 意 图 * 注意事项 用牙签研磨时，注意防止将抗A血清带到抗 B血清中，反之亦然。 如果凝集现象不太明显时，可用显微镜观察。 * 乙型肝炎病毒表面抗体的检测 ——双抗原夹心ELISA法 测定原理 采用纯化乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）包被反应板，加入待检标本，当标本中存在抗- HBs时，该抗体与包被HBsAg结合，再加入辣根过氧化物酶标记乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg –HRP），最后形成HBsAg-抗HBs-酶标记抗原复合物，加入底物产生显色反应。 * 无菌采血，离心2000rpm,3min，取上清作为待测标本(见玻片凝集实验) 每孔加入酶标记抗原1滴，37℃孵育30min 反应板中各加入待测标本2滴，同时设阴性、阳性、空白对照孔(NS) （反应板已用纯化HBsAg包被 ） 手工洗板，弃液拍干，重复5次 每孔加入显色剂A液、B液各1滴，置37℃孵育15分钟 每孔加入终止液1滴，混匀 目测法：与阳性和阴性对照比较，观察颜色深浅判断结果 【步骤】 * 实验报告 玻片凝集反应-ABO血型鉴定 酶联免疫吸附试验（双抗原夹心ELISA）