实验六：酶促反应动力学.ppt

酶促反应动力学 ___温度和离子对酶活性的影响 实验原理 本实验以唾液淀粉酶为例，它催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。不同温度、离子下唾液淀粉酶对淀粉的水解程度是不同的。 淀粉与碘反应呈蓝色。 糊精是淀粉分解的中间产物，其化学分子式与淀粉相同都是(C6H10O5)n，但聚合度介于淀粉与麦芽糖之间，根据分子大小与碘反应呈蓝紫、红等不同颜色.聚合度低的糊精不发生显色反应。麦芽糖与碘不呈色。根据上述性质，可用碘检查淀粉是否水解及其水解程度，间接判断淀粉酶是否存在及其活性大小。 * * 实验目的 1、了解温度对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。 2、了解离子对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。 实验用品 1、仪器和器材： 冰箱、恒温水浴锅、分光光度计、试管、移液枪和枪头、胶头滴管、烧杯等。 2、试剂： 1%淀粉液、碘液、1% NaCl溶液、1MHCl 、 1MNaOH、 0.1%CuSO4溶液、PH6.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、0.5%淀粉的0.5%NaCl液、稀释唾液、冰水浴。 淀粉 糊精 麦芽糖 深蓝 蓝紫、红 无色 (C6H10O5)n (C6H10O5)n C12H22O11 温度对酶活性影响 温度低时，酶促反应减弱。温度逐渐升高时，反应速度也随之逐渐增加。当温度升到某一定值时，酶促反应速度达到最大值，此温度称为酶作用的最适温度。但酶是蛋白质，随温度升高而发生变性，继续升高温度，反而使酶促反应速度降低。一般温度升至70-80℃以上，酶活性几乎全部丧失。 离子对酶活性的影响 酶的活性常常受到某些物质的影响 有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂； Cl-是唾液淀粉酶的激活剂，Br-、NO3-和I-对该酶也有激活作用，但较微弱。 有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。 Cu2+对唾液淀粉酶具有抑制作用。 激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且常具有特异性。 实验内容：（一）温度对酶活性的影响 1、将1号A管试剂迅速加入温度对应的B管中(为了最大限度保证酶的量)，此时为计时的起点（使用秒表），摇匀后放回对应温度继续水浴。注意：转移A管试剂前需将其摇匀。 2、然后每隔1min按上步操作依次把2、3、4、5、6号的A、B管混合 ，严格控制好时间。 3、准确反应13min，向1号管加入2滴1M HCl溶液，立即混匀，中止反应，按上一步的顺序和时间间隔依次对各管进行操作，并移至试管架。后再各用2滴1M NaOH溶液中和每管。 4、在每管中各加入2ml碘液并混匀，观察现象。 5、若不同温度梯度间现象差别不明显，则进行比色，通过光密度值来比较。 （二）离子对酶活性的影响 取3支洁净的试管，编号后按下表操作： 管号 1 2 3 1%NaCl(ml) 1 0 0 0.1%CuSO4(ml) 0 1 0 蒸馏水 (ml) 0 0 1 0.1% 淀粉液(ml) 3 3 3 100倍稀释唾液(ml) 1 1 1 37℃恒温水浴15min,取出滴加碘液 碘液 2 2 2 记录实验现象，做出结果分析。 注意事项 1、加唾液后应混匀，各管加碘液后摇匀。 2、关于酶类实验，特别注意器材干净，避免抑制因素干扰而影响结果。