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C：聚丙烯酰胺凝胶： 人工合成凝胶 以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的 控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶 交联剂越多，孔隙越小 聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-Gel P） P-2至P-300共10种 P后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。 D：聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel 大网孔结构， 用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子 适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。 实验技术 A：层析柱 玻璃管或有机玻璃管 层析柱的直径大小不影响分离度 样品用量大，可加大柱的直径 一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大 分离度取决于柱高 分离度与柱高的平方根相关， 柱过高，凝胶受挤压变形阻塞，一般不超过1米 分族分离时用短柱 凝胶柱长20-30厘米 柱高与直径的比较5:1─10:1 凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时用长柱 柱高与直径之线为20:1─100:1 层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，大－拖尾，降低分辩力。 精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。 B：凝胶选择 根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量 凝胶的粒度影响层析分离效果 粒度细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。 实验室分离蛋白质采用100-200号筛目的的SephadexG-200 脱盐用Sephadex G-25、G-50，用粗粒，短柱，流速快 C：凝胶的制备 商品凝胶（干燥颗粒）水液中膨胀 可加热 在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸，这样可大大中速膨胀，通常在1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时，自然膨胀需24小时至数天，而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。 样品溶液 有沉淀应过滤或离心除去 含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。 粘度不可大，含蛋白不超过4％，粘度高影响分离效果 样品浓度不可太低 样品粘度低时，可加甘油 上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定 分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％（一般约0.5-2ml） 分族分离时样品液可为凝胶床的10％ 蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％ 分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。 防止微生物污染 交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质易被微生物污染 常用的抑菌剂有: ⑴叠氨钠（NaN3）0.02％叠氮钠已足够防止微生物的生长,叠氮钠不影响抗体活力；不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。 ⑵可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02％。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳，在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效 ⑶乙基汞代巯基水杨酸钠 在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0.01％。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。 ⑷苯基汞代盐在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01％。在微碱性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用 应用 脱盐 鉴定分析 测定分子量 分级分离 R＝2×σVe/(Wa+ W