生物化学-蛋白质2课件.pptVIP

第五节 蛋白质的理化性质 （2）C-末端分析方法 多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 ①肼解法 （2）C-末端分析方法 ②羧肽酶水解法 能从多肽链的C-端逐个的水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。 目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y。A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。 羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。 但实际有时相连的氨基酸以相近的速度释放，结果不好分析。 （2）C-末端分析方法 ②羧肽酶水解法 （2）C-末端分析方法 氨基酸的释放量（摩尔数） 反应时间 Gly Ser Val 判断序列 -Val-Ser-Gly-COOH ②羧肽酶水解法 （2）β折叠 其结构要点如下： ①肽主链处于最伸展的构象，主要作用力---氢键多在股间而不是股内。 ②α碳原子位于折叠线上，由于其四面体性质，连续的酰胺平面排列成折叠形式。在折叠片上的侧链都垂直于折叠片的平面，并交替地从平面上下两侧伸出。 （2）β折叠 其结构要点如下： ③平行折叠片比反平行折叠片更规则，且一般是大结构，而反平行折叠片可以少到仅由两个β股组成。平行的β片层结构中，两个残基的间距为0.65 nm；反平行的β片层结构，则间距为0.70 nm。 （2）β折叠 主要是由两条肽链之间形成。 也可以在同一肽链的不同部分之间形成。 氢键 （3）β转角 蛋白质分子中，肽链经常会出现180°的回折，在这种回折角处的构象就是β转角，也被称为β弯曲、β回折和发夹结构。 β转角使肽链走向改变，一般含有2～16个氨基酸残基 。 （3）β转角 主要结构特点有： ①β转角中，第一个氨基酸残基的-C＝O-与第四个残基的-NH-形成氢键。 ②β转角的特定构象在一定程度上取决于它的氨基酸组成。 （3）β转角 β-转角 （4）无规则卷曲 无规则卷曲又称为自由回转，指没有特定规律的松散肽链结构。 肽的这种构象可能对蛋白质多变的立体结构与复杂功能具有贡献，已经鉴定到某些蛋白质中仅有这种结构，称为固有的无结构蛋白质。 1．蛋白质分子的二级结构 α螺旋 β折叠片 β转角 无规卷曲 1．蛋白质分子的三级结构 蛋白质三级结构是指上述蛋白质的α螺旋、β折叠以及β转角等二级结构受侧链和各主链构象单元间的相互作用，从而进一步卷曲、折叠成具有一定规律性的三维空间结构。 蛋白质三级结构的稳定主要靠次级键，包括疏水作用、氢键、盐键、范德华力等，还有二硫键等，其中疏水作用是主要作用力。 1．蛋白质分子的三级结构 磷酸丙糖异构酶的三级结构 1．蛋白质分子的三级结构 在蛋白质二级结构与三级结构之间，还有一些过渡结构层次，主要是超二级结构和结构域。 超二级结构是由S. T. Rao和M. G. Rossmann于1973年提出的，指多肽链上若干相邻的构象单元彼此作用，进一步组合而成的结构组合体。超二级结构有αα（螺旋-环-螺旋）、βαβ（折叠-螺旋-折叠）、ββ（发夹）、希腊钥匙等多种组合类型。 1．蛋白质分子的三级结构 常见的超二级结构 1．蛋白质分子的三级结构 结构域是主要存在于球状蛋白质分子中的两个或多个相对独立的、在空间上可以明显区分的三级折叠实体。一个分子中的结构域区间以共价键相连。 1．蛋白质分子的三级结构 免疫球蛋白的一个结构域 丙酮酸激酶的一个结构域 1．蛋白质分子的三级结构 维持三级结构的作用力 2．蛋白质分子的三级结构 维持三级结构的作用力 无三级结构 形成三级结构 2．蛋白质分子的三级结构 2．蛋白质分子的三级结构 肌红蛋白的三级结构 3．蛋白质分子的四级结构 蛋白质四级结构是指在亚基和亚基之间通过疏水作用等次级键结合成为有序排列的特定空间结构。 四级结构的球状蛋白质往往由几个被称为亚基的单位组成，这些单位有时也称为单体。 亚基通常由一条多肽链组成，有时含两条以上的多肽链，单独存在时一般没有生物活性。 3．蛋白质分子的四级结构 蛋白质可据四级结构分为单体蛋白质、二聚体、三聚体……寡聚体和多聚体。 寡聚蛋白质可以由单一类型的亚基组成，称为同聚蛋白质，也可以由几种不同类型的亚基组成，称为杂聚蛋白质。 3．蛋白质分子的四级结构 血红蛋白A 烟草斑纹病毒的外壳蛋白 3．蛋白质分子的四级结构 3．蛋白质分子的四级结构 四、蛋白质结构与功能的关系 自学。 第四节 蛋白质结构测定与多肽人工合成 一、一级结构的研究方法 二、研究蛋白质构象的方法 三、肽的人工合成 一、一级结构的研究方法 1．测定氨基酸的组成 2．蛋白质