生物化学-第二章蛋白质幻灯片.pptVIP

酪氨酸的?max＝278nm，?278=1.4x103; 苯丙氨酸的?max＝259nm，?259=2.0x102; 色氨酸的?max＝279nm，?279=5.6x103; 二.球状蛋白 1.球状（圆形） 2.亲水 3.极性基团分布于分子外侧 非极性基团分布于分子内侧 第三节.氨基酸的分离与测定 一.层析法 1.层析法原理 层析法是利用被分离样品混合物中各组分的化学性质的 差异（如溶解度、吸附力、电荷性质等），使各组分以不同 程度分布在两个“相”中。 固定相：被固定在一定的支持介质上的那一相。 流动相：在支持介质上移动的那一相。 当移动相流过固定相时，在流动过程中，由于各组分在 两相中的分配情况不同，电荷或亲和力不同等，以不同的速 度移动，从而达到分离。 2.层析方法 根据层析法的原理 分配层析法 吸附层析法 离子交换层析法 分子筛（凝胶过滤）层析法 亲和层析法 根据层析法的支持介质不同 滤纸层析 薄层层析 薄膜层析等 离子交换层析法 凝胶过滤层析法 （1）滤纸层析 滤纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法， 分配定律：当一种溶质在两种一定的互不相溶或几乎互不相溶 的溶剂中分配时，在一定的温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度 比与在这两种溶剂中的溶解度比值相等。 这个比值是一个常数，称为分配系数，以K表示。 分配系数（K）= 溶质在溶剂A中的浓度 溶质在溶剂B中的浓度 固定相—水，流动相—水饱和的有机溶剂 上行层析 层析剂 原点（点样） 溶剂前沿 层析样点 滤纸 迁移率Rf = 原点到层析样点中心的距离（X） 原点到溶剂前沿的距离（Y） X Y 影响迁移率的因素： 内因—氨基酸的性质，外因—溶剂、滤纸、温度、层析方式等。 （2）.离子交换层析 离子交换树脂是一种具有酸性或碱性基团的人工合成的高分子化合物 酸性基团 碱性基团 磺酸基（-SO3H） 羧酸基（-COOH） 季胺基[-N（CH3）3] 氨基（-NH3） + + 酸性基团—交换阳离子，碱性基团—交换阴离子 洗脱 离子交换树脂 样品 由于不同的氨基酸PI不同，在一定的PH溶液中 带电荷的性质不同，带电荷的多少不同，与不同 的离子交换树脂的结合能力不同。 洗脱时不能结合的最先被洗脱出来，结合能力 小的其次，结合能力大的最后被洗脱出来。 二.电泳法 1.原理 电泳：是指带电的质点在电场中向本身电荷相反的电极移动的现象。 带电质点移动的速度与外加电场强度、质点本身所带电荷成正比。 而与介质的黏度、质点大小成反比 2.方法 根据支持物不同可分为： 纸电泳 薄膜电泳 薄层电泳 凝胶电泳 三.氨基酸含量的测定 主要根据氨基酸的化学性质及其特定的化学呈色反应来测定 1.中和法测定氨基酸含量 2.显色分析法 （1）茚三酮反应 （2）R基反应 显色后通过比色的方法来测定其含量。 4.荧光分析法 与荧光试剂反应后测定荧光强度来确定氨基酸含量（如DNS法） 3.紫外分光光度法 Trp,Tyr,Phe可用紫外法来测定 第四节 肽 一.肽的结构 氨基酸残基 肽单位 二.生物活性肽 +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO- Met-脑啡肽 +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO- Leu-脑啡肽 H2N-CHCH2CH2-CO-NH-CH-CO-NH-CH2COOH COOH CH2 SH 2GSH GS-SG 1.谷胱甘肽 2.脑啡肽 Leu-(D)phe-pro-val-Orn Orn-val-pro-(D)phe-Leu 4.短杆菌肽S（Orn鸟氨酸） 3.催产素与加压素 第五节 蛋白质分类 一.根据蛋白质分子形状分类 1.球状蛋白 2.纤维状蛋白 二.根据蛋白质的组成成份分类 1.单纯蛋白 2.结合蛋白 清蛋白 核蛋白 谷蛋白和醇溶谷蛋白 色蛋白 精蛋白和组蛋白 糖蛋白 硬蛋白 脂蛋白