药物生物合成原理复习题1药生物合成原理复习题1药物生物合成原理复习题1药物生物合成原理复习题1.doc

基因工程、代谢工程部分： 名词解释： 基因工程的基本定义? 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。 限制性核酸内切酶 识别双链DNA分子中的特定序列，并切割DNA双链。主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵。 质粒 质粒是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。 质粒的不相容性 任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不相容性。 分子杂交技术 不同来源的单链DNA或RNA，通过碱基配对形成异质双链核酸分子的过程。包括DNA与DNA、DNA与RNA，RNA与RNA之间的杂交。 6、鸟枪法 随机获得供体细胞的全基因组DNA片段，然后通过快速有效的筛选程序从众多克隆中分离出含有目的基因的目的重组子，进而获得目的基因。鸟枪法适用于原核细菌目的基因的克隆分离。 基因文库 从特定生物个体中分离的全部基因，这些基因以克隆的形式 存在（人工构建）。根据构建方法的不同，基因文库分为：基因组文库（含有全部基因）和cDNA文库（含有全部蛋白质编码的结构基因） cDNA文库 用鸟枪法构建基因组文库，材料来自染色体DNA 用cDNA法构建cDNA文库，材料来自mRNA 9、包涵体 在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体（Inclusion Bodies，IB）。 融合蛋白 除了直接表达异源蛋白外，还可将外源基因与受体菌自身的蛋白质编码基因拼接在一起，并作为一个开放型阅读框架进行表达。由这种杂合基因表达出的蛋白质称为融合蛋白。 宏观逃逸率 当含有重组质粒的工程菌在非选择性条件下生长时，培养系统中一部分细胞不再携带重组质粒，这些空载细胞数与总细胞数之比称为称为重组质粒的宏观逃逸率。 初级代谢产物 是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。 次级代谢产物 是指生物生长到一定阶段才产生的化学结构十分复杂、对该生物无明显生理功能，或并非是该生物生长和繁殖所必需的物质，如抗生素、毒素、激素、色素等。 分解代谢阻遏 当微生物在含有两种能够分解底物的培养基中生长时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶的合成的现象。 15、营养缺陷型突变株:由于合成途径中某一步骤发生缺陷，终产物不能积累，这样就解除了终产物的反馈调节，使中间产物积累或另一分支途径的末端产物得以积累。 16、渗漏缺陷菌型突变株: 渗漏缺陷型突变株（leakage mutant）是指遗传性障碍不完全的缺陷型。由于这种突变是使它的某一种酶的活性下降而不是完全丧失，因此，渗漏缺陷型能够少量合成某一种代谢终产物，能在基本培养基上进行少量的生长。由于渗漏缺陷型不能合成过量的终产物，所以不会造成反馈抑制而影响中间代谢产物的积累。 17、累积反馈抑制: 在分支代谢途径中，任何一种末端产物过量时都能按一定百分比单独抑制共同途径中的第一个酶，而且各种末端产物的抑制作用互不干扰。当各种末端产物同时过量时，它们的抑制作用是累加的。各末端产物之间既无协同效应，亦无拮抗作用。 18、同工酶: 具有不同分子形式但却催化相同化学反应的酶称为同工酶 19、操纵元: 操纵元是指结构上、功能上、协同作用的相关基因组成的一个片段（区域），是基因表达和控制的一个完整单元。 20、代谢工程:采用重组DNA技术和高精度的分析生物学技术相关的遗传学方法，进行精确目标的基因操作，改变微生物原有调节系统，实现提高目的代谢活性和目的代谢产物量。 21、柔性位点 简答题 质粒构建的步骤 质粒构建“切、接、转、增、检”五步 ①DNA的体外重组（切、接）②重组DNA分子的转化和扩增（转、增）③转化子的筛选和鉴定（检） 细菌基因转移的方法 3、植物细胞基因转移的方法 DNA间接转化法：农杆菌介导基因转移 DNA直接转化法：（1）基因枪转化法（2）电击法（3） PEG介导基因转化法 质粒转入哺乳动物细胞的方法 ①磷酸钙共沉淀法②电击转化法③脂质体介导法④哺乳动物细胞的病毒转染法⑤血影细胞介导法⑥显微注射法 5、基因工程的支撑技术 1、核酸凝胶电泳技术 2、核酸分子杂交技术 3、细菌转化/细胞转染技术 4、DNA序列分析技术5、聚合酶链反应（PCR）技术 影响质粒转化率的因素 1、载体及DNA重组分子方面： 载体本身的性质：不同的载体转化同一株受体细胞，其