龙军真菌讲稿2.ppt

1 真菌药敏试验及真菌药敏判断标准解读 真菌药敏试验 微生物实验室检查进展 直接涂片 培养 真菌抗原检测 分子生物学技术 直接涂片1 肠道和口咽部涂片 念珠菌是正常人体胃肠道和咽部的正常菌群，所以不能以这些部位涂片见到孢子或培养出念珠菌即作为真菌感染依据必须与临床表现相结合来确定诊断。 从支气管肺泡灌洗液检查卡氏肺孢子虫是确诊的重要依据 直接涂片2 痰和粪便涂片 ?粪便涂片念珠菌20-30/油镜或占50%以上 ?痰标本涂片或培养未见细菌，有大量菌丝及孢子。真菌数每油镜视野20 ?口腔涂片未见细菌。真菌数20－25/视野，有菌丝。培养：纯培养真菌 ?阴道：培养出白色念珠菌。涂片见到菌丝和孢子 微生物技术----直接涂片 真菌直接镜检阳性所见 直接涂片3 有意义的涂片结果 ?机体内部标本如血液、腹水、C5F、脓肿穿刺液等 ?新鲜尿液见到大量菌丝及孢子 ?口腔、阴道、支气管灌洗液见到酵母样菌应作培养确定 ?组织真菌涂片 微生物培养技术 有意义的真菌培养标本 非经口痰标本 非插管尿标本 血液或其他无菌体液(胆汁、胸腹水、脑脊液） 微生物培养技术和进展 深部标本（痰、粪、尿、脓、体液、咽拭、尿道及阴道分泌物）标本接种于含氯霉素的沙氏葡萄糖琼脂及科玛嘉念珠菌显色培养基 分别置25°C及37°C培养48小时 常见的酵母在科玛嘉念珠菌显色培养基即可报告，鉴定的符合率在95％左右 微生物培养技术和进展 念珠菌显色培养基（CHROMagar Candida） 原理：几种常见念珠菌独特的酶底物与显色基团化学结合 用于鉴定95%以上的 -白念珠菌（绿、翠绿） -热带念珠菌（蓝） -克柔念珠菌（粉红，模糊有微毛） 亦可用于鉴定85%的光滑念珠菌（紫） 其它念珠菌呈白色 30－37℃培养48h后观察结果 此方法经济,但不够准确 微生物培养技术和进展 如为不显色的酵母，纯化后作API20C或自动微生物鉴定仪YST卡鉴定 如为霉菌，应种于察氏琼脂，其对青霉、曲霉及镰刀霉都具鉴定作用 CSF和血液种于沙氏葡萄糖琼脂，分别置25°C及37°C，1周,或直接接于血培养瓶中， 37°C，1周 微生物培养技术和进展 无菌部位采集的标本(如血,CSF、胸腹 水、关节液等)中分离的任何酵母都必 须鉴定到种，均有诊断意义。 同一部位反复分离出同一菌种也具重要 意义。 从非无菌部位(粪、痰、咽拭等)分离到 的条件致病菌(如白念珠菌)，如直接镜 检大量菌丝(+)，须结合临床认定具致病性 血培养注意事项 血培养的污染 易污染的微生物有时有致病作用吗？ 对两次不同部位血培养生长出不同微生物 微生物对抗生素均敏感 微生物快速生长 上述情况下应考虑为感染 临床实验室工作人员和医生之间应交流 血培养标本留取注意事项 严格皮肤消毒和瓶盖消毒 用安尔碘消毒皮肤， 1-2分钟自然干燥 用75%酒精消毒瓶塞并风干，以免造成假阴性结果 不建议使用真空针将患者静脉与血培养瓶直接相通，以避免培养肉汤返流入血，且难以控制采血量. 2小时内送检，如不能可放室温，但要标记 血标本留取注意事项 推荐使用两到三套血瓶(需氧+厌氧)送检，至少两套 抽血时间:寒站时先后抽两套,间隔时间不超过15分钟，以免影响治疗时机 真菌培养时间为5天，但双相真菌需2-4周，如马尔尼菲青菌，医生可注明 环境污染假阳性不容忽视 4-6月和9-10月为医院和外界空气中真菌高密度时期 相关分析发现病房的相对湿度和温度与病房真菌浓度高度相关，提示病房湿度和温度控制的重要性 仅靠开窗通风更新空气，在真菌高度繁殖时期效果差 环境污染不容忽视 使用新的消毒装置，实现边消毒，边工作 ICU病房空调出、入风口和水龙头表面真菌和曲霉污染最为严重 水源也易污染，国外报道有烟曲霉和镰刀菌由水源传播导致免疫抑制患者侵袭性曲霉感染的报道 强调无菌操作 微生物培养技术---念珠菌 《芽管试验》 ? 鉴酵母接种于0.5cc血清中混匀 ? 37℃2h后观察有无芽管形成 ? 须注意与芽孢间的区别 ?? 有芽管形成者即为白念珠菌。(98%) 微生物培养技术 芽管实验阳性(高倍) 微生物培养技术 《米粉小培养》 将无菌载玻片放入无菌平皿(9cm规格)，溶解培养基后倒在玻片上，待凝固后划分或接种待鉴菌种，旁放一温棉球保温，盖上平皿， 25℃,48h后取出小培养，加盖玻片后置显微镜下观察。 配方：米粉10g，吐温80