龙军真菌讲稿3.ppt

1 微生物检查技术 墨汁染色:阳性 曲霉菌检查 形态学观察和直接涂片为主 快速早期检查方法少 G实验和GM实验 曲霉菌检查技术—基础 烟曲霉 ? 菌落特征： ?? 生长快，绒毛状或絮状，表面深绿色或烟绿色 ?? 背面苍白色或淡黄色 ?? 48℃生长良好 ? 镜下特征： ?? 分生孢子头短柱状，分生孢子梗壁光滑，呈淡绿色 顶囊呈烧瓶状 ?? 小梗单层、分布在顶囊的上半部分 ?? 分生孢子球形、绿色、有小刺 曲霉形态 烟曲霉菌落 曲霉形态 烟曲霉棉兰染色 黄曲霉 黄曲霉形态 黄曲霉形态 黄曲霉 ? 菌落特征： ?? 生长快，羊毛状或棉毛状，表面黄绿色或棕绿色 ?? 背面无色或淡黄色 ? 镜下特征： ?? 分生孢子头放射状或疏松状，分生孢子梗壁厚粗糙 ?? 顶囊呈球形或近球形 ?? 小梗单层、双层或同时存在、布满顶囊表面 ?? 分生孢子球形、近球形 黄曲霉 黄曲霉分生孢子 棉兰染色 黑曲霉 ? 菌落特征： ?? 生长快，羊毛状或绒毛状，表面白色→黄色→黑色 背面无色或淡黄色 ? 镜下特征： ?? 分生孢子头放射状，或列柱状 ?? 分生孢子梗壁光滑，较厚 ?? 顶囊呈球形或近球形，小梗双层、密生于顶囊的全 部表面 ?? 分生孢子球形、有褐色色素沉积在细胞壁，粗糙有刺 黑曲霉 黑曲霉菌落 土曲霉形态 ? 菌落特征： ?? 生长快，绒毛状，有浅放射状沟纹 ?? 表面肉桂色或黄褐色；培养基可呈污褐色，背面淡黄色到棕色 ? 镜下特征： ?? 分生孢子头致密圆柱状 ?? 分生孢子梗无色光滑 ?? 顶囊呈半球形，上1/2~1/3处有双层小梗 ?? 分生孢子球形或近球形，壁光滑，棕色 土曲霉 土曲霉形态 土曲霉 土曲霉分生孢子头 棉蓝染色 构巢曲霉 ? 菌落特征： 中等速度生长，绒毛状→粉末状 表面：绿色或黄褐色?? 背面：紫色或橄榄色 ? 镜下特征： 分生孢子头呈密短圆柱形 分生孢子梗短，弯曲，光滑无色 顶囊呈半球形或烧瓶形，双层小梗 分生孢子球形，粗糙，有小刺或小皱褶 壳细胞较多（球形、膜厚较大），可见闭囊壳（灰白紫红色） 构巢曲霉 菌落形态 构巢曲霉 分生孢子头 曲霉菌检查技术进展 在曲霉感染的免疫学诊断中倍受青睐 ? 标本可取血清、尿液、脑脊液及BAL 液等 ? 被检测的抗原成分主要是半乳甘露聚糖(galactomannan, GM) 脂多糖 GM在感染后24 h即可检测出，与病情严重程度一致 ? 常用的是EL ISA、RIA 和乳胶凝集试验等 ? 敏感性和特异性因方法而异 曲霉半乳甘露聚糖抗原测定 曲霉抗原乳胶凝集试验: 特异性：90-100%；敏感性：26-76%(15ng/ml) 曲霉抗原EIA试验: 特异性：90%；敏感性：80-100%(1ng/ml) 动态检测,每周二次 GM试验参考值：I＞1.5阳性；1.0～1.5可疑；I＜1.0阴性 微生物检查技术和进展 美国和欧洲判断标准不同(1.0,0.6) 我国学者发现单次测定大于1.0 ，或连续两次大于0.8为阳性标准，敏感度和特异度均较高，分别为81.8%和93.3% 纪宇等 中华血液学杂志， 2007 28:83-86 曲霉感染抗原检测的优点 结果稳定：检测不受患者免疫功能状况的影响 ? 敏感性强：在临床症状出现同时或之前,便可在体液中检测出特异性抗原,故适用于早期诊断 ? 可判断预后及疗效：抗原浓度可随病情活动而变化,有助于疗效判定 微生物检查技术和进展 假阳性情况: 使用哌拉西林/他唑巴坦，某些葡萄糖酸盐制剂，与其他真菌抗原成分的交叉 正在申请“三证” 微生物检查技术进展 血浆?－1，3－D葡聚糖检测（G试验） 目的：通过测定血浆、体液及支气管肺泡 灌洗液中细胞壁成分（血浆?－1，3－D葡 聚糖），诊断深部真菌感染 原理：利用鲎的G凝血因子被?葡聚糖激活 后形成凝固蛋白，以浊度定量标本中的真 菌?葡聚糖浓度 微生物检查技术和进展 参考临界值：13.7pg/ml 真菌定植：13.7～20pg/ml 深部真菌感染：＞20pg/ml 意义： 早期诊断除结合菌、隐球菌外的深部真菌 感染，如念珠菌、曲霉等