免疫组化结果的分析和判断免组化结果的分析和判断免疫组化结果的分析和判断免疫组化结果的分析和判断.ppt

对照结果判断： 染色失败原因： 均为阴性 均为弱阳性（除阴性对照） 背景染色过深 阳性对照好，待检标本弱阳性 阳性对照无背景，待检标本背景深 判断原则： 实验设计 抗体选择 抗原定位性 抗原分布不均一性 假阴性常见原因：抗原丢失或减弱 抗体失效或稀释度不当 操作失误 假阳性常见原因：抗原弥散 抗原异位表达 瘤细胞吞噬 病变中正常组织残留 抗体交叉反应 内源性物质着色 边缘、刀痕、皱折、坏死或挤压区域不作为判断依据，应用“正反法”原则。 免疫组化标准化： 抗原特异性 抗体交叉反应和标记谱系 方法规范化 结果综合分析和判断 第五节 染色失败的可能原因 免疫组化染色的基本要求有二：①实验切片的阳性抗原定位准确，呈色鲜明，背景着色浅或无，二者的比值应大于1（阳性/背景）；②对照染色的结果应附合要求。否则，所得实验结果都是错误的，或为假阳性或为假阴性。 假阳性是指实验切片呈阳性，阴性组织对照或阴性试剂对照也呈阳性的结果，谓之假阳性。其原因与内源性干扰，试剂不纯，交叉反应等有关。 假阴性是指实验切片呈阴性，阳性组织对照及阴性试剂对照也均呈阴性的结果，谓之假阴性。其原因与组织处理不当，组织细胞抗原丢失或试剂错误(如漏加、错加、失效、变质等),操作失误等有关。 表中1～5结果无效，6、7结果可靠 （＋） （＋） （＋） （－） （＋） （＋） （－） 检测标本含抗体，结果可靠 （＋） （－） （－） 7 检测标本不含抗体结合可靠 （－） （－） （－） 6 非特异染色 （＋） （＋） （－） 5 阳性对照不含定位抗原 （＋） （－） （－） 4 阴性对照内含定位抗原 (＋)(－) （－） （＋） 3 非特异性染色 （＋） （＋） （＋） 2 抗体失活，操作有误 （－） （－） （－） 1 结果判断 检测结果 替代对照 阴性对照 阳性对照 免疫组化结果的分析和判断 第一节 免疫组化结果的判断原则 ? 免疫组化结果的判断原则概括起来有以下几点： ? ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内； PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。 ? ⒊阴性结果不能视为抗原不表达。由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。 ? ⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。 ? ⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。 * 第二节 对照染色设计 (一）对照染色的目的 设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三：①组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；②抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；③染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液的pH和离子强度不当等。 假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：①自发荧光或内源酶等干扰；②抗体试剂不纯(特别是一抗）；③操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；④Fc受体的干扰，等等。 （二）对照的种类及其选用目的 对照染色大致可分为：阳性组织对照、阴性组织对照及阴性试剂对照和自身对照四大类： ⒈阳性组织对照 指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。 ⒉阴性组织对照 指用已证实不含靶抗原的同步处理和免疫标记染色的组织对照。正确的结果应为阴性，目的是除外假阳性。 ⒊阴性试剂对照 是指用于证实在免疫组化染色中所用试剂，尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性而所设立的同步免疫染色对照，包括有：空白对照；替代对照；吸收试验和抑制试验等。目的在于除外假阳性和证实所用免疫组化试剂及其技术方法的有效性和待检实验切片免疫标记阳性结果的可靠性。 ⑴空白对照 指以缓冲液（PBS、TBS等）取代第一抗体（主要的，必要时还可做第二抗体及桥联抗体的空白取代），其他各步不变的试剂对照染色，结果应为阴性。 ⑵取代对照 指以所用方法第一抗体同源动物的