新泰一中北校高二生物课件基因工程上课4.ppt

3、将目的基因导入受体细胞 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、 Ca2+处理 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： * 复习回顾 1、获取目的基因的常用方法有哪些?这三种方法的应用前提是什么？ 2、基因文库的概念和种类？什么是cDNA文库？简要描述基因文库的构建方法？ 3、从基因文库中得到目的基因的方法? 4、什么是PCR技术、原理是什么、条件、操作步骤？ 5、PCR与DNA复制的区别？ 6、人工合成法的类型及操作步骤 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 重组载体 基因组文库 导入受体菌中储存 （2）.基因文库的构建方法 ①基因组文库的构建 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 导入受体菌中储存 ② cDNA文库的构建-----逆转录法： DNA复制 PCR技术 场所 原理 条件 解旋方式 酶 特点 结果 PCR技术扩增与DNA复制的比较 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP 四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化解旋 半保留复制、边解旋变复制 半保留复制、全解旋再复制 体外复制 主要在细胞核内 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶、解旋酶 反转录法 目的基因的信使RNA 目的基因（双链DNA） 化学合成法 目的基因合成的肽链氨基酸序列 信使RNA序列 基因的核苷酸序列 目的基因 合成 人工合成法（真核生物） 推测 推测 单链DNA DNA聚合酶 那么原核生物和真核生物基因结构有没有区别呢？ 化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？ 逆转录酶 非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 基因的结构 启动子 原核 真核 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游的RNA聚合酶结合位点: 启动子 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有RNA聚合酶结合位点(启动子)。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 与RNA聚合酶结合位点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、 _____的，先_____后_____ 编码区是_____ 的，边_________边_________ 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 连续 不连续 编码区 非编码 转录 翻译 转录 翻译 一、目的基因的获取 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 课堂小结： （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 1.过程: 基因表达载体的构建 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 Hin d限制性酶ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的DNA 质粒 构建表达载体 四环素抗性基因由于目的基因插入而失活，形成只具有氨苄青霉素抗性基因 DNA连接酶 人类胰岛素的基因 2.基因表达载体的组成： 它们所处的位置和有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 3、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在