绪论及蛋白质课稿.ppt

N端 C端 N端 C端 ?-转角 (?-turn) （非重复性结构） ?- 凸起（?-Bulge）非重复性结构 1、大多数为反平行?-折叠中的一种不规则情况 2、可引起多肽链方向的改变，但改变的程度不如?转角 没有一定规律的松散肽链结构。 酶的活性部位。 无规卷曲 纤维状蛋白 角蛋白： α-角蛋白是毛发中主要蛋白质 右手α- 螺旋 初 原纤维（左旋的三股α- 螺旋，直径2nm） 微原纤维（直径8nm） 大原纤维（直径200nm） 超二级结构和结构域 超二级结构：标准折叠单位，折叠花式（motif） 定义：是指若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体。 种类： （1）αα：左手卷曲螺旋（超螺旋）。有二股、三股和四股螺旋，是纤维状蛋白的主要结构元件。序列上存在七残基重复序列。 （2）βαβ：最常见的是Rossman折叠。 （3）ββ：反平行β折叠片，最简单的是β发夹，它可形成β曲折和希腊钥匙拓扑结构。 A．??；B. ?X? ； C ??? ； D. ?-曲折； E. 回形拓扑结构 几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) 结构: GSH过氧化物酶 H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶 NADPH+H+ NADP+ 主要功能: 谷胱甘肽—存在于动、植物及微生物中： 1.参与体内氧化还原反应 2.作为辅酶参与氧化还原反应 保护巯基酶或含Cys的蛋白质中 -SH的还原性 3.防止氧化物积累 名称 存在或来源 结构 功能 谷胱甘肽 动物植物细胞中 谷氨酸半胱氨酸甘氨酸组成GSH 有活泼巯基,可作为重要的还原剂保护体内蛋白质或酶分子中巯基免遭氧化,使蛋白质或酶处在活性状态；嗜核特性，保护DNA.RNA 催产素 下丘脑神经细胞合成的多肽 九肽，分子中有环状结构 子宫和乳腺平滑肌收缩，具有催产呵乳腺排乳的作用 加压素 下丘脑神经细胞合成的多肽 九肽，分子中有环状结构 促进血管平滑肌收缩，血压升高减少排尿 促肾上腺皮质激素 腺垂体、大脑、下丘脑 39个氨基酸ACTH 不同分泌出的功能不同 脑肽 动物脑中 Met-脑啡肽 阵痛作用 Leu-脑啡肽 胰高血糖素 胰岛α细胞分泌 29个氨基酸 促进肝糖原降解生高血糖,血管舒张,抑制肠蠕动及分泌 胃肠道活性肽 促胃酸激素 17肽 功能不同 肠促胰液素 27肽 肠抑胃素 43肽 活性肽的应用 活性肽的来源 体内途径 体外途径 分离纯化天然活性肽 化学合成制备活性肽 生物合成制备活性肽 酶法水解制备活性肽 活性肽的来源 蛋白质的一级结构 定义：蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。 主要化学键：肽键 二硫键的位置属于一级结构研究范畴。 一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。 蛋白质的一级结构 1、组成蛋白质的多肽链的数目 2、多肽链的氨基酸数目、种类和顺序 3、多肽链内或链间二硫键的数目和位置 研究内容 蛋白质一级结构预测 原则(步骤) 1、多肽链的分离 2、二硫键的断裂 3、每一条多肽链的氨基酸组成 4、鉴定多肽链的N-末端残基 5、鉴定多肽链的C-末端残基 6、裂解多肽链成较小的片段 7、测定各肽段的氨基酸序列 8、重建完整多肽链的一级结构 9、二硫桥位置的确定 蛋白质分子中氨基酸序列的确定 1多肽链的分离 测定蛋白质分子中多肽链的数目 根据蛋白质N-末端和C-末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量可以 确定蛋白质分子中多肽链数目 拆分蛋白质分子的多肽链 借助非共价结合的肽链可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍或高浓度盐处理 2、二硫键的断裂 过甲酸氧化切割或巯基化合物如二硫苏糖醇(DTT)还原切割，随后用碘乙酸反应保护游离的巯基。 3、氨基酸组成的分析 6NHCL回流20小时，蛋白质完全水解，不引起氨基酸消旋，但色氨酸破坏，羟基氨基酸部分水解，酰胺键水解；5NNAOH溶液共煮10-20小时，也可完全水解，但会引起消旋，但色氨酸不破坏。 再用水合茚三酮法测定含量，Edman反应将氨基酸转化为苯硫乙内酰脲衍生物,用高效液相色谱将其分离 4、N-末端残基的鉴定 与2,4二硝基氟苯或丹磺酰氯反应，PITC反应，氨肽酶法 蛋白质分子中氨基酸序列的确定 蛋白质分子中氨基酸序列的确定 5、C-末端残基的鉴定 （1）肼解法 蛋白质分子中氨基酸序列的确定 5、C-末端残基的鉴定 （2）还原法 肽链C-末端可用硼氢化锂（LiBH4）还原成相应的α-氨基醇 （3）羧肽酶法 羧肽酶A能水解除Pro Arg和Lys之外的