血液学一般检验(绪论、第一章)课稿.ppt

将推玻片向后稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向前方滑动。 血涂片的制作 均匀 厚薄 头体尾 边缘 两侧 注意： 血滴大，速度快、角度大 ----血膜厚 染料(天然染料和人工染料） 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。 碱性染料：阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料（如亚甲蓝、天青） 酸性染料：阴离子染料，能释放质子。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白，嗜酸性颗粒成分等。 复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料 物理作用：渗透、吸收、吸附作用等 化学作用：a、染料的化学成分：助色基团的存在。碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。 b. 蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时， -NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。 C.周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI（ pI 为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之， pH＞pI，则结合碱性染料。 染色原理 分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。 试剂 1. Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。 试剂 2.磷酸盐缓冲液（PBS） 磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g, 蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。 a. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上 b. 加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min c. 滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色10- 15分钟 d. 用清水冲洗，待干后油镜镜检 染 色 待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色1 min。然后滴加等量或稍多缓冲液，使其与染液均匀混合，静置10～15 min。用流水缓缓冲去染 液，待干镜检。 染色原理 基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。 试剂 Giemsa染液 甲醇 纯甘油 1. 甲醇固定干燥血膜3-5min 2. 将血膜在染液中浸染10-30min 3. 流水冲洗,待干后镜检 瑞氏和姬氏染粉按一定比例混合，用甲醇溶解配制成瑞-姬染液。 染色过程和染色原理与瑞氏染色类似。 新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，应贮存一段时间后再用。 不能使用肝素抗凝标本 玻片必须清洁、干燥、无尘。使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面 制作涂片时根据血细胞比容、血粘度的高低决定应采用血滴的大小及推片的角度和速度。 血涂片干透后方可固定染色。 根据染液浓度、室温及细胞多少决定染色时间 低倍镜下观察血涂片染色质量。 瑞氏染色对胞浆着色好，胞浆中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性等颗粒染色清晰、 色泽纯正，细胞核着色不理想 姬氏染色对细胞核着色程度适中，染色后细胞核结构清晰，胞质染色较差 瑞-姬染色使瑞氏及姬氏染色取长补短，优势互补 染色效果观察 染色效果观察 原理 待测标本经过适当稀释（或浓缩）后，充入计数池，在显微镜下计数一定体积内的细胞，再换算成每升标本内的细胞数。 方法评价 常用于各种细胞成份的计数，亦可用于其他体液的细胞计数。 计数误差大，不适用于大批量标本检测。 普通光学显微镜 一次性微量吸管 改良年鲍氏计数板（Neubauer） 盖玻片（24*20*0.6） 每块计数板分为上下两个计数池，计数池两侧各有一条支柱，用支撑盖玻片，立柱高度与计数池相差0.1mm 计数室边长为3.0mm,划分为9个大方格,每一大方格边长为1.0mm,面积为1.0mm2,和盖玻片之间形成的体积为0.1mm3,四角四个大方格单线划为16个中方格;中央大方格双线划为25个中方格。 1.检查、清洗计数板 计数板上有污物或水分会影响计数结果的 准确性 2.加盖片 将合适大小的盖玻片搭放在两侧 的平台上