氧化锌促生长答题.ppt

氧化锌促仔猪生长机理研究 1、早期断奶对仔猪的不良影响 2、应对早期断奶不良影响的营养调控策略 3、高锌对仔猪断奶应激的作用机理 现代集约化养殖模式下，通常采用早期断奶以提高母猪的繁殖性能，节约母猪饲养成本。但是早期断奶给仔猪带来多种应激如：仔猪与母畜的突然分离、被转群或重新合群后的新环境、由易消化吸收的液体奶质饲料向较难消化的固体饲料过渡等 早期断奶的不良影响 与哺乳仔猪相比，断奶仔猪胃内的pH值显著升高，可能是由于乳糖摄入不足，进而降低了胃液内酸性物质的产生。对事物中有害微生物的抑制作用降低。 断奶后仔猪肠道内乳酸菌的数量迅速减少，原有微生物平衡被破坏，增加仔猪肠道疾病感染几率 早期断奶显著加细胞炎症因子IL-1p，TNF-a， IL-6的表达。炎症因子含量的升高易引起炎症反应，同时降低仔猪仔猪抗菌肽PR-39在骨髓中的表达量，部分解释早期断奶后仔猪腹泻及肠道疾病感染率上升的现象 由于采食量下降，肠道营养供给不足，早期断奶显著增加小肠隐窝深度降低小肠绒毛长度，同时降低小肠刷状缘乳糖酶获活性，降低粘膜内氨基肽酶、二肽氨基肽酶活性，直接影响小肠的消化吸收。 仔猪早期断奶的营养调控策略 抗生素 其他调控手段：添加有机酸，抑制病原菌生长；提高日粮蛋白，补充肠道营养供给；抗菌肽，抗菌、抗病毒、抗炎症反应；免疫多糖，增强免疫。 高锌对仔猪断奶应激的作用机理 巨噬细胞对氧化锌的耐受性 在RAW264.7细胞培养基中添加0, 3 , 15 , 30 , 60μmol/L氧化锌及60μmol/L硫酸锌与细胞共培养一定时间。通过细胞形态变化、台盼蓝拒染实验及乳酸脱氢酶活性变化，检验巨噬细胞对氧化锌及硫酸锌的耐受性，确定巨噬细胞培养中氧化锌及硫酸锌的适宜添加浓度，为后续细胞实验做准备 与对照组A相比，细胞培养液中添加60μmol/L硫酸锌及3, 15, 30μmol/L的氧化锌处理48小时对细胞形态无明显影响。而添加60μmol/L的氧化锌组中的培养液里有细胞碎片产生，且细胞变小，成斑点。 此结果表明巨噬细胞培养液中添加60μmol/L氧化锌对细胞有明显的毒理作用，而3-30μmol/L氧化锌及60μmol/L的硫酸锌对巨噬细胞无明显影响 氧化锌对乳酸脱氢酶活性的影响 实验结果表明，60μmol/L氧化锌在与细胞共培养24小时后可损伤巨噬细胞，引起乳酸脱氢酶从胞质中漏出。 综合上述三个结果，得出3-30μmol/L氧化锌及60μmol/L硫酸锌对巨噬细胞无明显影响，此浓度适于后续细胞实验。 LPS炎症模型的建立 结果表明与对照组相比，培养液中添加1μg/lm LPS处理12小时后培养液中炎症因子IL-1β及TNF-α的含量显著升高，且趋于稳定。 氧化锌对LPS诱导炎症反应中细胞因子含量的影响 氧化锌对巨噬细胞吞噬活性的影响 培育60min后，用PBS缓冲液洗去未被吞噬的荧光小球，上流式细胞仪检测，计算巨噬细胞对荧光小球的吞噬率 吞噬率(%)= 氧化锌对大肠杆菌的抑菌效果及其机理 在培养液中添加浓度为0、0.025、0.05、 0.1、0.2、0.4、0.8μmol/ml的氧化锌，及0.8μmol/ml的硫酸锌，培养一定时间研究其对大肠杆菌K88生长影响。得出最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。 添加杀菌浓度的氧化锌，与菌共培养不同时间，通过原子力显微镜(AFM)及扫描电镜(SEM）观察菌的细胞形态 氧化锌处理后的K88在原子力显微镜下的形态 表明：1、氧化锌对猪源大肠杆菌K88具有很高的抗菌活性，其抗菌活性随着浓度的增加而显著增强。硫酸锌没有明显的抗菌效果 2、氧化锌的杀菌作用机理是氧化锌通过破坏大肠杆菌K88的菌体细胞膜导致内容物外泄，进而杀灭细菌 IPEC-J2细胞对氧化锌的耐受性 在肠道上皮细胞培养液中添加不同浓度的氧化锌（0、3、1、30、60μmol/L）及60μmol/L硫酸锌，培养一定时间，观察细胞形态变化并通过台盼蓝拒染实验及乳酸脱氢酶活性变化，研究肠上皮细胞对氧化锌的耐受性 结果：实验结果表明细胞培养液中添加60μmol/L氧化锌培养48小时后可影响肠上皮细胞的形态，并在培养24小时及48小时后显著增加细胞死亡率，60μmol/L的硫酸锌及3-30μmol/L的氧化锌无显著影响。 结论： 3-30μmol/L氧化锌和60μmol/L硫酸锌可用于后续细胞实验 氧化锌对IPEC-J2细胞紧密连接的影响 在细胞培养液中添加不同浓度氧化锌（0、3、15、30μmol/L）30μmol/L硫酸锌培养一定时间，进行荧光定量检测紧密连接基因Occludin及ZO-1的基因表达量并通过免疫荧光检测