临床检验学基础实验备课笔记.doc

实验八 血型鉴定、交叉配血 ABO血型鉴定（ABO blood typing） 一、实验目的： 掌握 熟悉principle）： 根据IgM类特异血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，根据抗原抗体存在的情况，判定血型。其方法包括正定型和反定型两种。 正定型：用已知标准抗血清检测红细胞上的抗原。 反定型：用已知红细胞测血清中的抗体。 三、试剂（reagent）和器材（equipment）： 生理盐水、标准RBC、标准抗A、B血清、玻片、试管、滴管、离心机 1．标准抗A、抗B、抗AB血清制备 a)青壮年混合血清，无菌分离，56℃30min灭活 b)鉴定： 特异性：O型10份、A、B型各1份，试管法鉴定无特异性凝集。 效价：抗A：1:128以上; 抗B：1:64以上（对倍稀释法，反应1h ，++为判断标准）。 亲和力：血清0.05ml + 10%RBC0.1ml→15S内出现凝集，3min凝块≮1mm2 。 冷凝集素：5只试管，各加N.S 0.2ml。1，2管加被检血清0.2ml，从第2管起倍比稀释， 各加2%O型或同型RBC，置4℃1h，观察结果。冷凝集素效价＜1:4 。 四、操作方法（procedure）： 1．静脉采血4ml（每4人1组，抽1人血液）。 2．1ml＋5ml生理盐水→洗涤红细胞（3000r/min×5min）→配制成5％红细胞生理盐水悬液。 3ml→置37℃，待凝，→分离血清（3000r/min×5min）备用。 3．取2支中号试管→标记抗A、抗B→各加1滴标准化抗A、抗B血清。 4．在上述试管中，各加1滴5％红细胞生理盐水悬液→室温放置10～15min→离心（1000r/min×1min） 5．观察并报告结果：凝集与否，凝集程度。A型血 、B型血、AB型血、O型血 五、注意事项（notice）： 1．严格查对，切不可将姓名、血型、标本等弄错。 2．每次滴加标本，均应更换吸管 3．年老体弱者ABO血型抗体反应较弱，因而观察结果时，不可用力振摇试管，以免弱凝集被摇散而呈假阴性 4．由于新鲜血清中有补体存在，抗体与相应抗原结合后，可发生溶血，故观察结果时发现试管内有溶血现象或镜检下红细胞有减少趋向，其意义与凝集相同，表示配血不合。 5．一次接受大量输血（10～20个献血者），献血者之间亦应交叉配血 六、ABO血型的临床意义（clinical meaning） 交叉配血（ABO blood typing） 一、实验目的： 掌握 熟悉principle）： 根据IgM类特异血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，根据抗原抗体存在的情况，进行交叉配血。 三、试剂（reagent）和器材（equipment）： 同血型鉴定 四、操作方法（procedure）： 1．静脉采血4ml（每4人1组，抽1人血液）。 2．1ml＋5ml生理盐水→洗涤红细胞（3000r/min×5min）→配制成5％红细胞生理盐水悬液。 3ml→置37℃，待凝，→分离血清（3000r/min×5min） 3． 1号管（主侧）： 病人血清 + 献血员2%红细胞各2滴 2号管（次侧）： 献血员血清 + 病人2%红细胞各2滴 3．取2支中号试管→标记抗A、抗B→各加1滴标准化抗A、抗B血清。 4．室温放置10～15min→离心（1000r/min×1min） 5．观察并报告结果：凝集与否，凝集程度。 ①如两管均无凝集，则报告： 病人XXX（X型）血清+献血者XXX（X型）红细胞 有或无凝集 病人XXX（X型）红细胞+献血者XXX（X型）血清 有或无凝集 （XX配血法） ②任何一管或两管有凝集，立即复查血型或查明其他原因如实报告，并与病室 联系， 决不能随便输血。 五、注意事项（notice）： 1．严格查对，切不可将姓名、血型、标本等弄错。 2．每次滴加标本，均应更换吸管 3．年老体弱者ABO血型抗体反应较弱，因而观察结果时，不可用力振摇试管，以免弱凝集被摇散而呈假阴性 4．由于新鲜血清中有补体存在，抗体与相应抗原结合后，可发生溶血，故观察结果时发现试管内有溶血现象或镜检下红细胞有减少趋向，其意义与凝集相同，表示配血不合。 5．一次接受大量输血（10～20个献血者），献血者之间亦应交叉配血 6．配血试管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，