复方丹参滴丸中冰片的生物体液的含量测定-天士力集团.doc

中药新药与临床药理.2001, 12(5):354-358 复方丹参滴丸中冰片的生物体液的含量测定 黄天来，王宁生 (广州中医药大学临床药理研究所.广州51D405) 摘要：以GC—MS联用技术测定大鼠灌服复方丹参滴丸后其血清中的冰片合量。冰片浓度在0.00505~40.1μg/ml范围内线性关系良好。血中回收率达72.82—86.77%，最低检测浓度为1μg/ml.本方法以萘为内标，SIM方式检测，定量准确、干扰少，日内及日间的RSD小于2.76%和1.93%。结果表明本方法可应用于复方丹参滴丸所含冰片的药代动力学等的近一步的研究。 关键词：＠复方丹参滴丸/化学；冰片/分析；GC—MS 中图分类号：R285.6 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2001）05-0354-05 冰片(Borneol)又称龙脑。合成品含龙脑和异龙脑，其药性和疗效自古至今已有很多研究，在中医临床中广为应用，对冰片的质量控制有人做过研究，最常用的方法是气相色谱法[1-5]和薄层扫描法[6-8]，然而中药制剂在生物样品中的冰片含量的测定，由于样品量少且其含量极低，以往的气相色谱方法不能满足测定的要求，有必要建立一种简便、灵敏、重现性和实用性均较好的方法，本文报导以GC—MS分析方法测定了大鼠灌服复方丹参滴丸后其血清中的冰片含量。 1 材料和方法 1.l 试药与试剂 冰片，中国药品生物制品检定所(化学对照品)；萘，中国药品生物制品检定所(化学对照品)；乙酸乙酯(AR级)、正己烷(色谱纯)；复方丹参滴丸，天津天士力制药集团，批 1.2 仪器及色谱条件 HP5890—5973型GC—MS(Hewlett—Packard，美国)。HP-1石英弹性毛细管柱，30m× 0.25mmlD×0.10μm膜厚，气化室260℃，接口280℃，柱温100℃～140℃，升温速率8℃/min，载气H2，柱前压60kPa，分流比10:1，EI源温度240℃，倍增电压1700V，选择离子检测(SIM)，冰片M/Z 95，萘M/Z128。Autosystem XL气相色谱仪、TURBOCHROM色谱数据处理系统(美国PE公司)。色谱柱：OV—1石英毛细管柱，15m x0.32mmIDx 0.4μm膜厚，中科院大连化学物理研究所；柱温130℃，进样口210℃，FID检测器温度250℃，高纯氮气压力5psi，分流比为10:1，空气流速450mL/min，氢气流速为45Ml/min。 1.3 给药方法和采血时间 SD健康大鼠，雌雄各半，体重(200±10)g(广东省医学实验动物中心提供)，灌服复方丹参滴丸8l粒/100g体重后5min、10min、15min、20 min、30min、45min、 60min、90min、2.5h、4h、6h、9h、12h、15h、18h，眼球取血，3000r/min离心后取血清，放置—40℃冰箱保存。 1.4 血清中冰片的提取 从—40℃冰箱中取出待测血清，待其恢复室温后，精密吸取0.5ml血清置提取试管中，加入0.505 mg/mL萘的正己烷溶液4μL作内标；加入1mL正己烷，于涡旋均匀器中30s，3000r/min离心，取上清液1μL进样分析。 2 结果 2.1 色谱分析 2.1.1 冰片在GC—MS条件下的离子流图和质谱图 经扫描后与图谱库对照，确认峰1：tR3.66min为异龙脑；峰2：tR3.74min为龙脑；峰3：tR3.91min为内标萘。选择M/Z95为冰片的检测离子，M/Z128为萘的检测离子。 2.1.2 冰片在气相色谱条件下的色谱图 峰1，2：tR4.359min，tR4.503m5n为冰片；峰3：tR4.776min为内标萘。 2.2 方法考察 2.2.1 线性关系 精确称取冰片、萘(内标)适量，用正己烷配制成1.01μg/mL，0.101mg/mL，1.01μg/mL的冰片工作液和0.505μg/mL的萘内标液，于4℃保存。于0.5mL空白血清中加入内标液4μL及冰片工作液，使冰片的浓度分别为0.00505，0.0101，0.505，1.01，10.1，40.1μg/mL，按上述样品处理法进行处理。GC—MS分析。所得峰面积之比(A/Ai)与浓度呈良好的线性关系，线性范围较宽，为0.00505—40.1μg/mL，其回归方程如下： 异龙脑：y＝0.1148x+2.2080×10-4 r=0.9999 龙 脑：y＝0.2947x-2.3288×10-4 r=0.9999 2.2.2 精密度 (1)日内精密度 取空白血清0.5Ml，加入冰片标准溶液，制成高、中、低3个浓度的血清样品。按线性关