广州市第八人民医院检验科卢业成主任关于人禽流感的实验室检测的.ppt

人禽流感的实验室检测 广州市第八人民医院检验科 卢业成 副主任技师 图一 禽流感病毒图解 禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。 目前为止，已证实能感染人的禽流感病毒亚型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等。 对有机溶剂敏感；常用消毒剂易将其灭活。对热敏感，对低温抵抗力强。紫外线直接照射可迅速破坏其活性。 禽流感病毒对禽致病性强弱划分的依据 禽流感病毒根据对禽致病性不同，可分为高、中、低三种，其划分依据： 在无类胰蛋白酶条件下，形成融斑的能力； 病毒颗粒HA蛋白分子上连接肽碱性氨基酸的多寡； 静脉致病指数： 2.0～3.0（波动1.74～3.0） 为高致病性 1.2～1.4 为中致病性 0（波动0～1.0） 为低/非致病性 为何高致病性H5N1亚型禽流感病毒至今仍不具有人传人能力？ 一般认为高致病性H5N1亚型禽流感病毒至今仍不具有人传人能力的原因为： 它们的基因组中不含有人流感病毒基因节段； 它们的受体特异性，不同于人流感病毒； 它们的HA蛋白分子上连接肽含多个碱性氨基酸。 一、实验室检测目的 1、提供确诊病例的实验依据（病原学/血清学）。 2、及时分离出人禽流感病毒并了解其亚型。 3、及时了解病毒株基因组及抗原特性，为疫情预测和 预防提供科学依据，建立我国人禽流感病毒基因库。 A、是否含有人流感病毒基因节段。 B、受体特异性。 C、HA蛋白分子上连接肽碱性氨基酸的多寡。 4、了解所分离毒株的来源。 5、为诊断试剂制备和疫苗生产提供毒株，同时也为抗 体测定提供合适的抗原。 6、通过耐药试验，为治疗药物使用提供科学依据。 二、实验室生物安全 按照《禽流感实验室检测技术方案》及《传染性非典性肺炎实验室生物安全操作规范》的要求： 凡操作活病毒的试验（如微量中和试验、特异性H5的RT-PCR病毒核酸检测阳性的采样标本的病毒分离、尸检标本的检测）必须在生物安全III级（BSL-3）的条件下进行。 其余的试验（如特异性H5的RT-PCR病毒核酸检测）可在生物安全II级+（BSL-2+）的条件下进行。 按照《禽流感职业暴露人员防护指导原则》的要求： 实验室工作人员应采取相应的生物安全防护，并经过相应的专业技术培训。 三、标本的采集、包装、运送及保存 1、采集对象 人禽流感疑似病例，临床诊断，确诊病例。 人禽流感疑似病例，临床诊断，确诊病例的密切接触者，一周内出现流感样症状者。 与患禽流感的病、死禽密切接触者，一周内出现流感样症状者。 不明原因肺炎住院患者。 其他根据需要采集的对象。 2、采集人员 经过技术培训的医生、护士、CDC工作人员。 三、标本的采集、包装、运送及保存 3、标本种类及采集时机 上呼吸道标本：包括鼻拭子，鼻咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液。最佳采集时间为发病后3天内，一般不超过7天。 下呼吸道标本：只采集重症患者，无时间限制。包括气管吸取物、支气管洗液、肺组织活检标本。 尸检标本：病人死亡后应尽早进行解剖。无菌条件下主要采集肺和气管，条件允许下，也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等。每种组织应多部位取材，每部位应取20～50g，淋巴结取2个。 血清标本：要空腹采集，采集量为3～5ml。急性期血样应尽早采集，不晚于发病后7天；恢复期血样在发病后2～4周采集（要注意病人是否真正康复和停药）。 三、标本的采集、包装、运送及保存 4、采集方法 各种标本的采集方法参见《人禽流感样品采集、运输和检测技术规范（试行）》。 5、标本包装 标本必须保存于大小合适、带垫的外螺旋盖的塑料管中，管外写明标本编号、病人姓名及采样日期。 将保存标本的塑料管放入大小适合的塑料袋内密封，每袋只装一个标本。 标本相关的详细信息填写“广东省禽流感疑似病例样本送检登记表”，用塑料袋密封。 三、标本的采集、包装、运送及保存 6、标本保存 用于病毒分离的标本应尽快进行接种，能在24小时内接种的标本可置于 4℃冰箱暂时保存，不能在24小时内接种的标本应置于 -70 ℃或以下保存。如无 -70 ℃保存条件，则于 -20 ℃冰箱暂存。 血清标本可在 4 ℃冰箱保存 1～3天，-20 ℃或以下可长期保存。标本运送期间应避免反复冻融。 所有标本一式两份，其中一份单独保存，以备复核。 三、标本的采集、包装、运送及保存 7、标本运输 标本放入专用运输箱内，四周放置冰袋，空隙部分用具有吸水和缓冲性能的材料充填。病毒分离用标本可置液氮运输罐内用于长距离运送，所有运送容器外必须具有生物危险标记。 四、人禽流感的实验室检测 1、经典检测方法 病毒分离与鉴定：