探究无机硒对癌细胞的杀伤作用.ppt

* * 探究无机硒对癌细胞的杀伤作用 天津市第102中学 张文胜 实验过程 动物细胞培 养液的配制 细胞 的复苏 细胞 的消化 动物细胞 传代接种 动物细胞 传代培养 对实验细胞 的药物处理 细胞形态 学观察 实验流程 动物细胞的复苏及消化 复苏：肝癌细胞HepG2、黑色素瘤细胞B16为液氮冻存细胞株，首先从液氮中取出细胞株，迅速置于37℃水浴中溶化，将细胞悬液与5mL培养液混合，1000rpm离心10min，弃去上层培养液；以5mL培养液重悬浮接种于50mL细胞培养瓶中，在37℃，5% CO2条件下培养，次日半量换液已贴壁，约48h后细胞80%接触汇合； 消化：以0.25%胰蛋白酶（含0.2% EDTA）2mL消化细胞，至倒置显微镜下观察到细胞变圆时用5mL含血清培养液终止消化，1000rpm离心10min 肝癌细胞HepG2细胞消化前后的状态 离心（一）制备离心液 离心（二）消化后细胞的离心 消化后离心的肝癌细胞HepG2 （左）、黑色素瘤细胞B16 （右） 动物细胞培养液的配制 细胞培养液为DMEM培养基+10%胎牛血清+0.5%双抗(青霉素、链霉素）。超净工作台消毒后,无菌操作，分别用无菌移液管移取DMEM培养基10mL +10%胎牛血清+0.5%双抗，混匀后分成两瓶；同样方法在配制两瓶，待用。 终止消化并1000rpm离心10min 完毕，弃去上层培养液；肝癌细胞HepG2 、黑色素瘤细胞B16分别以10mL培养液悬浮接种于50mL的细胞培养瓶中，每种分为两瓶，标记。 动物细胞的传代接种 动物细胞的传代接种 接种完的人肝癌细胞 接种完的小鼠黑色素瘤细胞 动物细胞的培养 接种后的四个培养瓶放在37℃，5% CO2条件下培养，约48h后细胞80%接触汇合；扩增足够细胞量以用于后期实验。 CO2培养箱中的癌细胞 在37℃，5% CO2条件下培养48h 设定培养条件: 37℃，5% CO2条件下培养48h *