细胞工程部分章节重点总结归纳.doc

第四章细胞培养技术 1,细胞培养(Cell Culture)*** 是指从生物体内取出组织或细胞，在试管和培养平皿内模拟体内生理环境，于无菌、适当温度和一定营养条件下，使之保持一定的结构和功能，以便于我们观察、研究的培养技术 二，培养细胞的生物学特征 2，细胞生长方式*** 贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长的细胞生长方式 悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面的细胞生长方式 半悬浮生长：某些特别的细胞 3，细胞类型** 贴附型细胞**(Anchorage-dependent cell)：多呈上皮样或成纤维细胞样，正常细胞具有接触抑制和密度抑制的特性。 上皮细胞型(Epithelium)：扁平、不规则多角，彼此紧密相连，单层；如：来源于外胚层、内胚层的细胞 成纤维细胞型(Fibroblast)：梭型、不规则三角或多角型，具短突起；如：来源于中胚层细胞 游走细胞型(Wandering)：有伪足或突起，可游走或变形运动，散在生长；如：阿米巴样神经胶质细胞 多形细胞型(Polymorphic)：多角型具长神经纤维；如：神经元细胞 悬浮型细胞**(suspending cell)：大多取自血液、脾或骨髓的培养细胞 多为圆型；如：淋巴细胞、白细胞、某些肿瘤细胞 4，培养细胞的生长特点：贴壁、接触抑制、密度抑制。 1）接触抑制(Contact inhibition)***： 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，发生细胞生长和移动抑制的现象称接触抑制（即贴壁细胞生长一旦相互汇合接触，即停止移动和生长的现象）。是区别正常细胞与癌细胞标志之一。 密度抑制**(Density inhibition)： 细胞密度达到一定程度，培养液因营养消耗、代谢产物累积，导致细胞分裂停止 5，细胞周期概念（cell cycle） ** 是指一个母细胞分裂结束后形成的子细胞开始至下一次,再分裂结束形成2个子细胞终止所经历的全过程。 Or是指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程，可分为间期和分裂期（M期）。 细胞周期 = 分裂间期+分裂期 = G1期 + S期 + G2期 + M期 6，体外培养细胞寿命的过程分为三个阶段**：原代培养或初代培养期、传代期、衰退期 7，每代细胞的生长过程***——每代分为三个阶段：注意与细胞系生长的异同 潜伏期(latent phase)：24-96h 指数生长期：一般2-5天，又称对数期(logarithmic growth phase) 平台期(Plateau phase)：又称生长停止期(Stagnate phase) 传代**：当细胞增殖到一定程度，将细胞分开接种到多个新的培养瓶，使之继续培养称传代。 8，每代细胞生长特点*** 潜伏期：贴壁、恢复阶段，增殖极慢 指数增生期： 细胞增殖旺盛，成倍增长。指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志 通常以细胞分裂相指数(Mitotic index, MI)表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数 指数增生期的细胞活力最好，是进行各种实验最佳时期，也是冻存细胞的最好时机 停滞期或平台期： 细胞长满瓶壁后，细胞活力低、不再分裂，不及时传代，细胞脱落、死亡 9，生长曲线(Growth curve)** 每次传代接种后，细胞的这些生长增殖过程，若进行检测计数，绘制成曲线，叫生长曲线。 各细胞的生长曲线各具特点，是该细胞生物学特性的指标之一。 10，体内外细胞的差异与分化* 体内外细胞的差异 体外培养细胞失去原有组织细胞形态，分化减弱或不明显 体外培养细胞功能变化：功能单一，出现衰老、转化现象 体外培养细胞出现环境适应现象，形态、功能出现相应改变 体外细胞的分化 体内外细胞分化表现不同，体外培养细胞的分化表现与组织来源明显相关 三，细胞的基本培养技术 11，原代培养 原代培养概念***：即从供体获取组织后的首次培养 特点：1）细胞生物学特性未发生很大变化，最接近和反映体内生长特性，适合作药物测试和细胞分化等实验研究； 2）原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后停止生长，一般不超过60-70代 12，原代培养步骤 组织取材 组织细胞的分离***： 1mm3组织块，仅周边少数细胞可穿过组织束缚，获得生长。组织块越小，爬出的细胞越多 组织分散方法：机械法、消化法（胰蛋白酶法；胶原酶法） 细胞培养：单层细胞法（常用）、悬浮细胞法（适于悬浮生长的细胞）、组织块法（简便、长出细胞的量较少）、 13，贴壁细胞传代方法*** 吸尽培养瓶中的培养液，PBS洗一次 加入胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准)静置2-10 min (显微镜下动态监测) 吸去胰