日立L-8900氨基酸自动分析仪.ppt.ppt

日立 L-8900 氨基酸自动分析仪 内容 氨基酸相关内容介绍 氨基酸分析仪发展及生产厂家 氨基酸分析仪原理及相应部件 样品的制备 应用 常见故障的分析与处理 保养 一 氨基酸相关内容介绍 氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。 含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物 氨基连在α-碳上的为α-氨基酸 组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸 不同氨基酸等电点 丙氨酸 Ala （A）6.02 精氨酸 Arg （R）10.76 天冬酰胺 Asn （N）5.41 天冬氨酸 Asp（D） 2.98 半胱酰酸 Cys （C）5.02 谷氨酸 Glu （E） 3.22 谷氨酰胺 Gln （O）5.65 甘氨酸 Gly （G） 5.97 组氨酸 His （H）7.58 亮氨酸 Leu （L） 5.98 赖氨酸 Lys （K）9.74 蛋氨酸 Met （M）5.75 苯丙氨酸 Phe （F）5.48 脯氨酸 Pro （P）6.30 丝氨酸 Ser（S）5.68 苏氨酸 Thr （T）6.53 色氨酸 Trp （W）5.88 酪氨酸 Tyr （Y）5.65 缬氨酸 Val （V）5.97 异亮氨酸 Ile （I）6.02 氨基酸的化学性质 氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它们都能产生氨基与羧基的一般反应，如脂化、甲基化、乙酰化以及酸碱的中和作用等。有些氨基酸由于存在其它基团而产生特殊反应，如半胱氨酸的巯基（-SH） 茚三酮反应 氨基酸的分离分析 特殊沉淀法 离子交换法 萃取法 毛细电渗析 离子交换法分离分析氨基酸的原理 根据氨基酸是两性电解质这一特性，以及目的氨基酸与杂质氨基酸 pK、pI 值的差异，利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同进行分离纯化。 氨基酸分析仪进入国内市场已有近三十年的历史，它是专用于测定蛋白质水解液（水解氨基酸）及生理体液中（游离氨基酸）混合氨基酸含量的一种专用仪器，现已广泛应用于各行各业。 它与其他分析仪器区别在于只能检测氨基酸，不能作为他用，具有专一性。 1958年 stein 与moore 两人先后独立发明离子交换分离、茚三酮柱后衍生氨基酸自动分析仪。基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）， 1972年stein 与moore 两人同获诺贝尔奖。 IEC是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法 。 三 氨基酸分析仪原理及相应部件 氨基酸分析仪基本分析原理： 各种蛋白质是由20种氨基酸首尾相连，并以一定的顺序组成肽链。用水解的方法将肽链打开，形成单一的氨基酸进行分析。所有的氨基酸在低pH值的条件下都带有正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但吸附的程度不同，碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。按照氨基酸分析仪设定的洗脱程序，用不同离子强度、pH值的缓冲液依次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来（先酸性氨基酸再中性氨基酸最后碱性氨基酸），被洗脱下来的氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应（135度），生成可在分光光度计中570nm和440nm检测到的蓝紫色物质（仲氨生成浅黄色物质440nm检测），外标法定量。 1. 氨基酸在pH 2.2的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但结合强度各不相同。 2. 随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断的被吸附、解吸附。由于氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小），吸附强度有差异。 3. 不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸＞芳香族氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸及羟基氨基酸。 4.提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱上洗脱下来，洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。 5.氨基酸标准溶液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺序一定，标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定，由此可计算出样品中各种氨