- 1、本文档共51页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
3 Real Time PCR解析方法 1. 标准曲线分析 2. 融解曲线分析 3. 绝对定量和相对定量解析方法 Real Time PCR解析方法 绝对定量解析方法 提取样品 引物设计 标准品制备 Real Time PCR反应 数据分析 流 程 绝对定量解析方法 通过制作标准曲线来确定样品的初始模板拷贝数或浓度。通常应用于病毒、细菌、衣原体、支原体的定量检测及转基因食品的检测。 105 104 103 101 扩增曲线图 标准曲线图 检测样品 检测样品 102 相对定量解析方法 以上条件不可能同时得到满足,必须用内对照基因(管家基因)校正, 进行相对表达量分析。 Sample B Sample A 目的基因扩增效率相同 RNA提取效率相同 细胞起始数相同 进行相对表达量分析必要性 实际上目的基因表达量分析 相对定量解析方法 管家基因 维持细胞基本代谢活动所必须的基因, 如:GAPDH、β-actin等。 筛选方法 根据文献提供 通过具体实验筛选 主 要 内 容 Real Time PCR基础知识 1 2 Real Time PCR实验方法 3 Real Time PCR解析方法 4 Real Time PCR应用实例 ◇ 对SARS病毒基因进行定量分析 绝对定量 相对定量 ◇ 分析小鼠PAH基因在不同组织中的表达量变化 绝对定量应用例 对SARS样品中所含SARS病毒RNA进行定量 检测方法 TaqMan? probe 法 检测样品 3个从SARS样品中提取的Total RNA 目的基因 SARS病毒RNA 内 参 SARS Internal Control RNA 标 准 品 SARS Control RNA 试 剂 One Step PrimeScript? RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(DRR064) 仪 器 Smart Cycler Ⅱ SYN247 F02 SYN247R03 SYN247 F01 SYN247R02 SYN247R01 SYN247 F01 BamH Ⅰ Hind Ⅲ pBluescript II SK(+) Vector T7 Promoter BamH Ⅰ Hind Ⅲ Sac Ⅰ site SARS Control RNA构建 绝对定量应用例 对SARS培养液中所含SARS病毒RNA进行定量 纯化的SARS Control RNA OD值测定结果 体外转录的SARS Control RNA 电泳照片 M1 M2 M1: ?-Hind Ⅲ digest M2: DL2,000 Marker DNase I 处理前 DNase I 处理后 绝对定量应用例 对SARS样品中所含SARS病毒RNA进行定量 ?DNA BNITMSARAs2 Adaptor R SacⅠsite Bam HⅠsite BNITMSARS1 Adaptor F T7 Promoter SARS Internal Control RNA的构建 A A pBluescriptII SK(+) Vector 绝对定量应用例 对SARS样品中所含SARS病毒RNA进行定量 探针的选择 Template Primer TaqMan? Probe 5’ 端报告基团 3’ 端淬灭基团 SARS Control RNA or SARS Genomic RNA 共用 FAM标记 Eclipse标记 SARS Internal Control RNA 共用 ROX标记 Eclipse标记 绝对定量应用例 对SARS样品中所含SARS病毒RNA进行定量 SARS Control RNA 105-101扩增曲线 SARS Genomic RNA Sample 1、2、3扩增曲线 SARS Internal Control RNA扩增曲线 标准曲线 绝对定量应用例 对SARS样品中所含SARS病毒RNA进行定量 定量结果 对三个样品所含SARS病毒RNA进行了准确定量。 绝对定量应用例 对SARS样品中所含SARS病毒RNA进行定量 相对定量应用例 分析小鼠不同组织中PAH基因表达量的变化情况 检测方法 SYBR Green I 荧光嵌合法 管家基因 GAPDH基因 目的基因 PAH基因 标 准 品 cDNA 试 剂 PrimeScri
您可能关注的文档
- 生物统计28420课件.ppt
- 生物统计 农业类28371幻灯片.ppt
- 生物统计实验-SAS幻灯片.ppt
- 生物统计学5课件.ppt
- 生物无机化学 概论课件.ppt
- 生物下游技术课件.ppt
- 生物芯片技术、产业现况与趋势幻灯片.ppt
- 生物新课程教学设计与案例1幻灯片.ppt
- 生物性污染对食品安全的影响63幻灯片.ppt
- 生物序列的同源性有哪些信誉好的足球投注网站_-blast简介及其应用幻灯片.ppt
- 外卖食品安全风险的治理构建与实践向度.pdf
- DB15T 2190-2021 岭南温暖区玉米机械化籽粒直收生产技术规程.docx
- DB15T2178-2021 金莲花种植技术规程.docx
- DB1504╱T 1027-2021 日光温室番茄越冬茬生产技术规程.docx
- 区域性地震安全性评价数据库规范 (DB15T 3688-2024).docx
- DB15∕T 2382-2021 草原生态修复监测核心数据规范.docx
- DB15∕T 2362-2021 固定污染源废气 低浓度颗粒物的测定 β 射线法.docx
- DB15_T 2909-2023 优质燕麦草饲喂奶牛节本增效技术规程.docx
- 健康中国背景下食品安全风险防控体系创新探讨.pdf
- 我国食品安全信息共享机制建设析论.pdf
文档评论(0)