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第四章 微生物检验基础技术 阳江职业技术学院 授课教师：钟旭美 第一节 染色与细菌的形态观察技术 微生物一般都是很小的生物体，通过染色的方 法，可以强化细胞或细胞组分与周围环境之间 的反差，是利用普通光学显微镜来观察微生物 细胞的简捷方法。通过本节染色技术的学习， 可了解染色的原理，掌握制作简单装片的技能， 各种染色方法的基本操作，通过对染色标本的 观察，我们会更熟练地使用显微镜。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 第一节 染色与细菌的形态观察技术 ① 在洁净无油脂的载玻片上滴上一滴生理盐水（如果是液体菌悬液，则可不滴）; ② 用灭菌接种环挑取菌落少许至载玻片的生理盐水内并轻轻涂布成薄薄的菌膜。若是菌液标本，则用无菌接种针直接涂布成菌膜。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 涂布的标本，一般在室温下自然干燥，若需加速干燥，则可在酒精灯火焰上方利用其热空气加温，切忌火烤和温度过高。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 标本在未染色之前须进行固定。固定的目的主要是杀死细胞，让细胞物质凝固并使细胞粘附在玻片上。细菌的固定常用的也是火焰加热法。将干燥涂片迅速通过火焰 2 ～ 3 次，温度不宜过高，以玻片背面触及皮肤有热感而不烫手为度。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 染色的目的是增大标本与环境的反差，便于在显微镜下观察。以普通涂片标本的染色为例，就是将所需染色液滴加在标本上，以覆盖涂膜为够，达到所需染色时间，倾去染液，水洗，吸干即成。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 有的染色还需要增加媒染剂，以增大染料与被检标本物质的亲和力或使染料更好地固定于被染标本。媒染剂可用于细菌标本固定之后，也可包含在固定剂或染色液中。革兰氏染色中的路哥氏碘液就是媒染剂。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 使着色的染料脱去颜色称为脱色，能脱色的物质称为脱色剂。在染色中，使用脱色剂的作用有的是起溶媒作用，有的是影响细菌蛋白质的电离度，改变电荷的性质和数量，因而影响染料的染色质量。利用脱色剂主要是检查染料与细菌结合的稳定程度，作为鉴别染色之用。如革兰氏染色使用乙醇（95％左右乙醇，脱色作用最大），就是鉴别不同细菌。使用脱色剂时，就是将脱色剂滴加在经过染色的标本上，作用一定的时间后，倾去脱色剂，水洗即成。有的脱色一定要掌握好时间，否则不能达到理想目的。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 在进行鉴别染色时，已经进行过脱色的标本，常需用复染剂重复染色一次，使复染剂与初染颜色形成鲜明对比。复染不宜太强，以免覆盖初染颜色。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 简单染色流程： 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 革兰氏染色流程： 涂片 干燥 固定 初染 水洗 媒染 水洗 脱色 水洗 复染 水洗 干燥 镜检 芽孢染色流程： 涂片 干燥 固定 染色 水洗 复染 水洗 干燥 镜检 第一节 染色与细菌的形态观察技术 荚膜染色法流程： 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 鞭毛染色法流程： 涂片 干燥 固定 A 染初染 B 染复染 水洗 干燥 镜检 第一节 染色与细菌的形态观察技术 简单染色 简单染色法又叫普通染色法，是只用单一种染料进行的染 色。染料选择： 碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 使用条件：一般情况下简单染色都用碱性染料。 酸性染料：伊红、酸性复红或刚果红等。 使用条件：培养基 pH 下降时。 第一节 染色与细菌的形态观察技术 革兰氏染色的原理 第一节 染色与细菌的形态观察技术 革兰氏染色的意义 第一节 染色与细菌的形态观察技术 革兰氏染色过程 第一节 染色与细菌的形态观察技术 微生物革兰氏染色图片 第一节 染色与细菌的形态观察技术 微生物革兰氏染色图片 第一节 染色与细菌的形态观察技术 微生物革兰氏染色图片 第一节 染色与细菌的形态观察技术 微生物革兰氏染色图片 第一节 染色与细菌的形态观察技术 微生物革兰氏染色图片 第一节 染色与细菌的形态观察技术 染色基本原理 用着色力强的染色剂孔雀绿在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后