检验核医学的技术进展与临床应用幻灯片.pptVIP

检验核医学的技术进展与临床应用 彭志平 重庆医科大学 放射免疫分析法 1959 美国Yalow Berson 1977 获诺贝尔医学生物学奖 医学生物学超微量分析的里程碑 使人体内微量生物活性物质的测量成为可能 对现代医学的发展起到推动作用 放射免疫（RIA）的优势 集中了放射性核素示踪技术的高灵敏度和免疫发应的高特异性 R：放射性核素示踪 高灵敏（10-7分子/ml 或 -9~ -15 g/ml） 不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号 (标记物的放大效应) I：免疫学反应 高特异 以抗体为结合剂 采用放射性核素标记物为示踪剂，以特异性结合反应为基础，以放射性测量为定量手段，在体外对微量活性物质进行定量检测的一类分析技术。 放射性竞争结合分析 放射免疫分析 RIA 放射性非竞争结合分析 免疫放射分析IRMA 体外放射配体结合分析优点 灵敏度高 特异性强 放射性核素不引入体内 应用范围广 被测样品用量小 操作简便 易于自动化 现代医学的发展疾病诊断的革新 可在没有任何临床症状，而病人体内发生 1. 基因表达异常 2. 受体分布异常或受体功能改变 3. 器官代谢异常 4. 激素水平异常 酶、神经递质 ……等异常， 可早期发现。 体外分析和影像学的发展起了很大作用 例如：癌症的早期诊断 放射免疫分析 RIA 基本原理 竞争性结合的抑制反应 非标记抗原（检测对象或标准品） 标记抗原 抗体限量 标记和非标记抗原具有相同的免疫活性 同时与限量的抗体进行免疫结合反应 彼此竞争 相互抑制 反应式* *Ag+ Ab *Ag-Ab+ *Ag + Ag 限量 Ag-Ab + Ag Ag: 待测抗原 *Ag: 标记抗原 Ab: 抗体 Ag-Ab: 抗原抗体复合物 *Ag-Ab: 标记抗原抗体复合物 基本试剂 标准抗原 即标准品，与待测物具有相同的化学结构、免疫学活性 标记抗原 是RIA的示踪剂，125I，纯度高，合适的比活性，标记后抗原免疫活性不受破坏 特异性抗体 特异性高，滴度高，亲和力大 分离试剂 分离方法 双抗体法 沉淀法 吸附法 固相法 基本操作步骤 加样 温育 分离 放射性测量 绘制标准曲线 查待测物含量 RIA四十年的发展和挑战 方法的更完善，灵敏度、精密度的提高，质量控制体系的完善，方法的简化 在RIA的基础上，一大类新的测量方法的发展 免疫放射分析IRMA 基本原理 抗原与特异性抗体间的特异性结合 检测对象为抗原 标记的是抗体，抗体过量 标准抗原或待测抗原与抗体的结合不存在竞争 非竞争性放射分析 双位点(夹心)固相免疫放射分析法 基本特点 标记物为抗体，不影响抗原的免疫活性 使用的是单克隆抗体，特异性明显提高 单克隆抗体为大分子物质，碘化标记抗体比抗原容易，产物比较稳定 检测灵敏度较RIA高，且检测范围扩大 操作更为简便、快速 抗体用量大，成本较高 仅适用于蛋白质类大分子物质的检测 新技术的挑战 临床的发展和需要 样品量的增大 自动化程度的要求 非放射性免疫分析方法的开发 不同标记物标记的免疫方法 几种重要的标记免疫分析方法 方法名称 英文缩写 标记对象 标记物 分析对象 放射免疫分析 RIA 抗原 放射性同位素 不限 酶免疫分析 EIA 同上 酶 不限 荧光免疫分析 FIA 同上 荧光化合物 不限 化学发光免疫分析 CLIA 同上 发光化合物 不限 脂质体染料包藏免疫分析 抗原 磺基