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生物技术在水产品中的应用 中国农业大学食品科学与营养工程学院 报告人：罗永康 主要内容 生物传感器技术 1 免疫学技术 2 分子生物学技术 3 DNA探针杂交技术 4 生物传感器技术 生物传感器(biosensor)对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。是由固定化的生物敏感材料作识别元件（包括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质）与适当的理化换能器（如氧电极、光敏管、场效应管、压电晶体等等）及信号放大装置构成的分析工具或系统。生物传感器具有接受器与转换器的功能。 生物传感器技术 水产品中挥发性氮类 以假单胞菌为敏感材料，以固定化细胞作为识别元件形成微生物细胞传感器检测水产品中TMA，检测范围约为5～26μmol。 将黄嘌呤氧化酶、核苷酸酶和核苷磷酸化酶共同固定在膜表面，制备5一核苷酸酶固定化酶膜和核苷磷酸化酶一黄嘌呤氧化酶共固定化酶膜，并将其与氧电极共价结合，同时为传感器附设小型阴离子交换树脂柱，则实现了不同核苷类物质的分离与检测，最终可测定样品的K值。 水产品中核苷酸类物质 水产品中多胺类物质 将腐胺氧化酶固定在微平面薄膜氢过氧化物电极上，当酶催化腐胺转化为醛时，电极将检测到过程中所消耗的氧。当底物浓度为0．03～3¨mol／L时，氧消耗与其呈现良好的线性关系。 生物传感器技术 水产品中 重金属 Danielsson等人利用汞、铜等重金属离子对于脲酶的抑制作用，发展了检测水产品中该类重金属的酶传感器，检测限可达到10μg／kg 水产品中毒素 Kreuzer等以碱性磷酸酶为标记，利用SPE构建了电化学免疫传感检测平台，对于贝毒等水生毒素的检测限可以达到μg／L，检测时间30min，能够较好地满足现场检测需要。 水产品中 细菌 Abdel—hamid等人利用部分浸没的免疫电极，发展了一种更为新型的电化学免疫传感器。免疫电极在工作状态下部分浸没于反应体系中，从而在其表面形成超弯液面，其厚度约为0.4～0.8mm，可以将检测灵敏度提高6倍以上，如对于大肠杆菌的检测限可降低至150cell／mL。 免疫学技术 单克隆 抗体 Maddison B C等利用该技术制备了虹鳟鱼prion的单克隆抗体，对于检测重要经济鱼类中可遗传的海绵状脑病发挥重要作用。 免疫学技术 凝集 反应 马家好等利用凝集反应试验，诊断了淡水养殖鱼类主要细菌性传染病；杨广智等用此法检测出了草鱼出血病病毒。 免疫学技术 荧光 抗体 鄢庆枇等应用荧光抗体技术检测牙鲆体内的弧菌；余俊红等得出应用间接荧光抗体技术既可以诊断发病的感染花鲈，也可检测带菌状态或未发病的感染花鲈。 免疫学技术 酶免疫 Snow M等利用出血性败血症病毒的ELISA检测方法检测感染的大菱鲆；樊景凤等应用间接ELISA法检测凡纳滨对虾红体病病原菌取得较为满意的效果。 分子生物学技术 16 S r RNA检测技术 基因芯片 限制性 酶酶切检测技术 核酸杂交技术 PCR 技术 分子生物学技术 分子生物学技术 核酸杂交 技术 雷质文等采用原位杂交技术检测中国对虾体内的白斑综合征病毒(WSSV)。 Hasson K W等建立了用特异的cDNA基因探针作原位杂交检测TSV。 Martine Z通过核酸斑点杂交方法可以检测水产品中鳗弧菌的8个血清型，其最低检出量可以达到150 Pg。 Rehnstam A S等设计了25个碱基的寡核苷酸探针，用印迹杂交法则可以直接从病鱼肾脏中检出鳗弧菌。 分子生物学技术 多重 PCR 张新中等针对创伤弧菌gyrB基因的不同位点设计了3对引物，对3种海产品进行了创伤弧菌的检测，结果在3种海产品中均能特异性地检测到创伤弧菌。 常规 PCR 战文斌等采用Kimura设计的引物，用PCR技术对不同生长时期的中国对虾进行了鳗弧菌的检测；邓先余等建立了副溶血弧菌16 S~23 S rDNA基因区间序列的PCR技术。 荧光 PCR 张振冬等用实时荧光PCR技术检查水生动物病原体取得良好效果。 分子生物学技术 16s r RNA 技术 养殖环境 中微生物 的检测 养殖甲壳 类病原菌 海洋鱼类 病原菌 淡水养殖 病原菌 分子生物学技术 Einer-Jensen K等通过RFLP技术分析鱼体棒状病毒血红素败血病病毒的基因型。 限制性酶 酶切技术 分子生物学技术 基因芯片技术 鳗弧菌 创伤 弧菌 副溶血 弧菌 神经坏死病毒 霍乱 弧菌 出血病毒 DNA 探针技术 诊断的灵敏度较高 测定水产品 中微生物 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 志贺氏菌 李斯特菌 耶希氏菌 DNA 探针技术 美国的CENE-TRAK公司已开发出大肠杆菌的商品化DNA探针系统,此系统最