3、1菊花的组织培养给力的课件.ppt

（一）植物组织培养概念 （三）植物组织培养的理论基础---细胞全能性 概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。 表达条件：离体条件 无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件的控制 三、影响植物组织培养的因素 1、材料的种类、年龄及保存时间长短等 2、营养 3、植物激素 4、PH、温度、光照等条件 3、植物激素的影响 常用植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势 激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方向 供参考的配方 1、诱导菊花愈伤组织： 在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度均为0.5mg／Ｌ ２、诱导菊花从芽： 在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度分别为2---3mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ 3、诱导菊花生根： 在MS培养基各成分用量减半，并添加入NAA或IAA，质量浓度均为0.1mg／Ｌ 4．温度、光照、pH的影响 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒 培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h 结果分析与评价 （一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格 练习 1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备 1、配制各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配制培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③ 培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 （三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟。 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成0.5～1cm的小段，用镊子夹取菊花茎段接种。 4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，形态学上端朝上，形态学下端朝下，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分 正常苗 污染苗 1、外植体带菌 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作时带入 4、环境不清洁 污染途径 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 （四）培养 （五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。一般放置在20～25℃的遮荫环境中，适应5～7d。试管苗不萎蔫，有新生长的趋