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北京地区监测样本中A型口蹄疫的发现及确诊 靳兴军1，付彩霞1，郑瑞峰1，郭峰1，陈立本1，刘湘涛2，何继军2，冯小宇1* （1、北京市兽医实验诊断所，北京 100101；2、中国农业科学院 兰州兽医研究所 国家口蹄疫参考实验室 甘肃省生物监测工程技术研究中心 甘肃 兰州 730046） 摘要：2010年1月北京市兽医实验诊断所在开展常规重大动物疫病监测时，从大兴区礼贤镇龙头村龙头奶牛养殖小区检测出口蹄疫病毒核酸阳性样品，经基因扩增测序后分析，初步确定为A型口蹄疫病毒。北京市兽医实验诊断所在对该小区采取封锁措施的同时，立即将核酸阳性样品送往兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室进行病原分离定性。经病原定型、病毒分离和核酸检测及基因测序最终确定为A型口蹄疫。测序分析属A型K 亚洲系毒株，与A/HuB/CHA/2009、A/VN/02，03，09，11，16/2009等A型毒株VP1核苷酸同源性达97%～99%左右，属高度同源。 关键词：奶牛；A型口蹄疫 奶牛A型口蹄疫是一种急性、热性、高度传染性烈性传染病，病原为小核糖核酸病毒科口腔病毒属和乳房病毒属病毒。A型口蹄疫主要侵袭奶牛的乳房，特别是正在泌乳的高产牛和刚刚分娩不久的奶牛。造成久治不愈的乳房炎，并很快停止泌乳。怀孕的母牛易造成流产，还易导致屡配不孕，损失极其巨大[1]。2009年，湖北武汉、新疆、上海等地陆续发生牛口蹄疫疫情。国家口蹄疫参考实验室确诊的这类疑似口蹄疫疫情为A型口蹄疫疫情[2-3]。 2010年1月北京市兽医实验诊断所在对全市牲畜养殖场（小区）、运输、市场等环节开展重大动物疫病监测时，从大兴区礼贤镇龙头村龙头奶牛养殖小区检测出23份口蹄疫病毒核酸阳性样品，在对该小区采取封锁措施的同时，立即将核酸阳性样品紧急送往兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室进行病原分离定性。 1 材料与方法 1.1试验材料及样本 RNEASY RNA抽提试剂盒为QIAGEN公司产品；AMV反转录酶、5×AMV缓冲液、pGEM-Easy 载体连接试剂盒均为Promega公司产品；基因扩散产物纯化回收试剂盒，均购自大连宝生物工程有限公司。口蹄疫K抗原酶联免疫吸附试验试剂盒、SPF鼠由兰州兽医研究所提供。样品均为奶牛O-P液。 1.2 抗原定型抗原捕获ELISA反向间接血凝试验。病毒分离抗原捕获ELISA鉴定为A型K抗原阳性；反向间接血凝试验鉴定为A型K抗原阳性。核酸检测测序属A型K 亚洲系毒株。其与我国2009年武汉、上海等A 毒株以及2009年越南毒株（A/VN/02，03，09，11，16/2009）和2010年韩国A型毒株（A/Pocheno/KOR/2010）VP1核苷酸同源性9%～99%左右，属高度同源；其与我国1960年代毒株同源性80%-82%之间，遗传关系较远。一迅速采取强制措施，对礼贤镇龙头奶牛养殖小区进行封锁，扑杀阳性牛和同群牛共575头，并全部进行了无害化处理；二对养殖场内残留的饲草、饲料、奶牛粪便和其它污染物进行无害化处理，并对全场进行彻底消毒；三立即对区内其它养殖小区进行排查，保证畜牧业生产安全。 *通讯作者：冯小宇，男，贵州人，高级兽医师，主要从事动物疫病诊断工作。Tel：010E-mail: hairen_2000@ 本论文发表信息：中国兽医科学，2011，S1（41）：378-380