小鼠睾酮ELISA快速检测试剂盒.doc

小鼠睾酮ELISA快速检测试剂盒 使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 产品编号：CSB-E05101m检测范围：ng /ml -25.6ng /ml 特异性：睾酮 有效期：6个月2-8℃避光保存） 预期应用：ELISA睾酮。 说明 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。实验原理 试剂盒组成及试剂配制 酶板(Assay plate )：一块（96孔）。 标准品（Standard5瓶Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 Standard 5 0.1ng/ml 0.4ng/ml 1.6ng/ml 6.4ng/ml 25.6ng/ml 酶结合物（HRP-conjugated antibody）： 1×6ml/瓶Substrate A）：1×7ml/瓶。Substrate B）：1×7ml/瓶浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释倍。 终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶需要而未提供的试剂和器材 标准规格酶标仪 高速离心机 电热恒温培养箱 干净的试管和Eppendof管 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 Standard 1- Standard 5，第一次使用前先用0.5ml蒸馏水溶解，放置混匀后使用。 将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50ul；其余每个检测孔直接加待测标本50ul。 每孔加入酶结合物50ul（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育2小时。 手工洗板，弃去孔内液体甩干，37℃避光显色 数据处理 手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的0D值为纵轴，画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清OD值找到对应的浓度值。 计算机：使用线性拟合功能，应将标准品S1-S5的浓度取对数（Log(浓度)）作为X，将对应的OD值减去空白对照孔OD值后取对数（Log(OD值-NSB)）作为Y，进行线性拟合。再从拟合线上计算出待测血清浓度。 注意事项