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毛细管电泳 简介 毛细管电泳（Capillary Electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳或毛细管电分离法，是一类以毛细管为载体、以高压直流电场为动力，依据样品中各组分迁移速度和分配行为的差异而实现分离的新型液相分离技术，具有高效、快速、灵敏、试剂和样品用量少等特点，是近年来发展最快的分析方法之一。 原理 分析分离装置主要包括高压电源及其回路系统，毛细管柱系统，检测器系统和进样系统。在电解质缓冲溶液中，通过一定的方法带上电荷样品粒子在高压电场作用下，以不同的速度随电渗流迁移，先后到达检测器被检测。 原理 CE所用的石英毛细管柱在内充液 pH=3 时，其表面硅羟基解离成 SiO2-，使内壁带上负电荷，和溶液作用形成双电层在高电压电场作用下，双电层中溶剂化的水合阳离子层引起柱中溶液在毛细管内整体向负极移动，形成电渗流。然后带电粒子在毛细管内电解质溶液中的迁移速度等于电泳速度和电渗流二者的矢量之和。假如毛细管两端加的是带正向电压，则正电荷粒子最先流出，中性粒子的电泳速度相当于电渗流速度；带负电荷粒子运动方向与EOF方向相反，但 EOF速度一般大于电泳速度，故其最终会在中性粒子之后流出，从而实现各种粒子的分离。 优点 高灵敏度：紫外检测器的检测极限在10-13-10-15mol之间，荧光检测可达10-19-10-21mol 高分辨：峰分离效率超过一百万理论塔板数，一般可达几十万。 速度快：许多分析在十分钟内完成 进样少：一般需要毫微升的进样量 成本低：一般只需要可长期使用的毛细管和及微量的可自己配置的缓冲液。 分类 毛细管区带电泳 毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis, CZE)是使用裸毛细管和真溶液性质的电解质缓冲溶液进行的毛细管电泳技术。CZE分离机理是基于各被分离组分的荷质比之间的差异,在电场力作用下，分离物质在背景缓冲溶液中因迁移速度的差异而分离，除了溶质组分的结构特点和背景缓冲溶液组成外，不通过其他因素对分离条件的影响。通常把CZE看成其他各种毛细管电泳分离模式的母体。应用范围包括氨基酸、多肽、蛋白质、离子对映体拆分和很多其他本身能带电或在一定条件下能带上电荷物质的分离。 毛细管胶束电动色谱 MEKC采用临界胶束浓度以上的表面活性剂在运行缓冲液内形成疏水内核外部带负电的动态胶束假固相，利用溶质的疏水性差异，在溶液和胶束假固相间分配的差异进行分离。该方法不仅能分离中性溶质，而且能分离带电组分，拓展了毛细管电泳技术的应用范围。 毛细管电色谱 毛细管电色谱（CEC）以内含色谱固定相的毛细管为分离柱，兼具毛细管电泳及高效液相色谱的双重分离机理，既可分离带电物质也可分离中性物质。毛细管电色谱法是用电渗流或电渗流结合压力流来推动流动相的一种液相色谱法。 毛细管等电聚焦 CIEF是指依据两性化合物等电点的差别，当施加直流电压时，在毛细管内将建立起由阳极到阴极逐步升高的pH梯度，具有不同等电点的物质在电场作用下迁移到等电点的pH位置，聚集形成窄的聚焦区带，使各种组分达到分离。 毛细管等速电泳 CITF是一种“移动界面”电泳技术，采用两种淌度差别很大的缓冲液分别作为先导电解质（充满毛细管）和尾随电解质（置于一端的电解槽中），使被分离物质按其电泳淌度不同，在先导离子和尾随离子之间形成区带，从而得以分离。该方法目前常用作柱前浓缩方法用以富集样品，以提高毛细管电泳的灵敏度，降低检出限，可用于紫外吸收弱的样品组分的分离。 毛细管电泳柱子的处理 1、开毛细管电泳柱子的检测口 购买来的柱子要上仪器，第一步就是量取好所需长度，开检测口。 开检测口的方法 （1） 用刀片刮往毛细管柱子的表面涂层2mm； （2） 用硫酸出往一部分涂层； （3） 用火烧往一部分涂层； 2、毛细管电泳柱子的前处理方法 柱子处理步骤： （1）甲醇冲5-10分钟（洗去毛细管在制作过程中带来的矿物油和脂类） （2）1M的盐酸冲洗半个小时左右（除去可能存在的金属离子） （3）然后再用1M的氢氧化钠冲洗30分钟左右（活化硅羟基） （4）0.1M的氢氧化钠冲洗到基线基本平直为止（平滑毛细管的内表面） （5）最后用水，缓冲溶液平衡柱子。 * *