Gsm和2―Mib在斑马鱼体内的富集及暂养效果研究.docVIP

Gsm和2―Mib在斑马鱼体内的富集及暂养效果研究 　　摘要：利用固相微萃取-气质联用和内标定量技术建立了水体和斑马鱼体内土臭素（Gsm）和二甲基异冰片（2-Mib）的分析方法，并利用该方法研究水体中Gsm和2-Mib在斑马鱼体内的富集和暂养效果。结果表明，水体中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率范围为97.2%～109.9%和88.5%～101.6%，斑马鱼中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率范围为78.5%～87.2%和88.3%～91.4%；水体中不同浓度的Gsm和2-Mib能在鱼体内较快富集，鱼体内Gsm和2-Mib浓度和水体中的浓度成正相关；鱼体内Gsm和2-Mib的浓度和暂养时间成反相关，但降低较慢。水体中的Gsm和2-Mib通过鱼鳃和体表迅速富集到鱼体中，成为鱼体土腥味来源的主要外源因子，清水暂养对土腥味物质Gsm和2-Mib的去除有一定作用，但仍需配合其他去除方法使用效果更佳。 　　关键词：土臭素；2-甲基异冰片；固相微萃取；气质联用；暂养 　　中图分类号：X174 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）16-4272-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.16.051 　　鱼类相比陆生动物能为人们提供更加营养安全的动物蛋白，但由于捕获前特有的异味物质直接影响鱼类产品的品质，使得产品价值大打折扣，对水产业发展带来很大的负面影响[1]。鱼类捕获前异味化合物主要来源于水体和饵料，目前为止已报道导致鱼体产生土腥味的最常见的两种物质为Gsm和2-Mib[2～6]，来源于水生微生物（如蓝藻）的次生代谢产物，都具有双环叔醇结构。尽管Gsm和2-Mib在环境中的浓度很低，但由于其极低的异味阈值，因此仍是鱼体异味产生的主要贡献化合物[7，8]。本试验结合固相微萃取和气质联用的方法建立水体和斑马鱼体中Gsm和2-Mib的内标法定量分析方法，并利用该方法结合斑马鱼暴露和暂养试验分析Gsm和2-Mib在鱼体内的富集和暂养去除效果，为捕获前鱼体内土腥味物质的形成机制及控制措施提供方法与数据支撑。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　试验用斑马鱼购自中国科学院水生生物研究所，Gsm和2-Mib标品、1-氯癸烷、饱和食盐水等其他试剂均为分析纯。 　　7890A-5975C气质联用仪，DF-101S集热式恒温磁力搅拌器，CAR/DVB固相微萃取萃取头和手柄。 　　1.2 方法 　　1.2.1 气质联用仪条件 参照文献[9-12]，色谱柱：DB-5MS弹性毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升温：柱初温30 ℃，保持2 min，以5 ℃/min升至60 ℃，保持2 min，再以10 ℃/min升温至250 ℃，保持2 min，最后以20 ℃/min升温至280 ℃，保持2 min；进样口温度250 ℃；载气流量1 mL/min；不分流；传输线温度280 ℃；离子源温度230 ℃；四极杆温度 150 ℃；电子能量 70 eV；离子质量扫描范围（m/z）45～350，设定Gsm和2-Mib的SIM定量离子。 　　1.2.2 标准曲线的绘制 分别取10 mL ddH2O和 3 g斑马鱼肉加入7 mL饱和食盐水溶液的混合匀浆液，再分别加入5 ng 1-氯癸烷内标和混标（Gsm和2-Mib）0.2、0.5、1、2、5、10和20 ng，将装配好的CAR/DVB萃取头插入顶空瓶中。在集热式恒温磁力搅拌器中60 ℃恒温萃取50 min，取出萃取头插入气相进样口，热解析5 min。标准曲线横坐标为Gsm和2-Mib与内标的浓度比，纵坐标为Gsm和2-Mib与内标的峰面积比。 　　1.2.3 添加回收率 分别取10 mL ddH2O和3 g 斑马鱼肉加入7 mL饱和食盐水溶液的混合匀浆液，再分别加入5 ng 1-氯癸烷内标和混标（Gsm和2-Mib），使水溶液中Gsm和2-Mib的终浓度分别为0.1、0.3、0.5、1.0 μg/L（每个添加浓度3个平行），将装配好的CAR/DVB萃取头插入顶空瓶中。在集热式恒温磁力搅拌器中60 ℃恒温萃取50 min，取出萃取头插入气相进样口，热解析5 min。根据标准曲线计算浓度与实际添加浓度的比值，计算添加回收率。 　　1.2.4 斑马鱼暴露富集试验 将4月龄斑马鱼养殖在混标浓度分别为1 μg/L和0.1 μg/L的水样中，暴露0、2、7 d后分别采集水样和鱼样，利用建立的固相微萃取-气质联用的方法测定样品中Gsm和2-Mib的浓度。 　　1.2.5 斑马鱼暂养试验 将暴露7 d的斑马鱼暂养在不含Gsm和2-Mib的清水中，养殖0、2、7 d分别采集水样和鱼样，利用建立的固相微萃取