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L+―酒石酸生产过程质量控制的快速HPLC同步检测方法研究 　　摘要 建立L（+）-酒石酸生产过程中6种有机酸的快速HPLC同步检测方法。结果表明，最佳条件为以20 mmol磷酸二氢钾水溶液（用磷酸调pH值至2.5）∶甲醇=95∶5为流动相，检测波长采用206 nm，流速为1 mL/min，进样量为10 μL，柱温为30 ℃，可较好地分离和测定不同样品中的6种有机酸，且回收率高，重复性好。 　　关键词 HPLC；酒石酸；有机酸；检测 　　中图分类号 O657.7+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）17-0249-02 　　Abstract The analytical HPLC method that enables rapid quantification of six types of organic acids in the production of L（+）-tartaric acid was established. The results showed that the HPLC optimized conditions were as follows：Aliquot samples were collected and subjected to HPLC at a flow rate of 1 mL/min using a solution of 5% methanol in phosphate buffer（20 mmol，pH=2.5）as the mobile phase，and injection volume was 10 μL. UV detection was performed at 206 nm，and all runs were carried out at 30 ℃.As a result，it′s able to accurately quantify the 6 kinds of organic acids，yielding minor variations in batch-to-batch reproducibility. 　　Key words HPLC；tartaric acid；organic acids；determination 　　酒石酸（Tartaric acid），即2，3-二羟基丁二酸，是一种羧酸?o存在于多种植物中?o如葡萄和罗望子?o也是葡萄酒中主要的有机酸之一。酒石酸分子中有2个不对称碳原子，故有3种光学异构体，即右旋酒石酸或D-酒石酸、左旋酒石酸或L-酒石酸、内消旋酒石酸。 　　L（+）-酒石酸最大的用途是作为饮料添加剂，其次是作为药物工业原料。在当代有机合成是非常重要的手性配体和手性子，可以用来制备许多著名的手性催化剂，以及作为手性源来合成复杂的天然产物分子。酒石酸也是一种抗氧化剂，在食品工业中有所应用。生化试验中可利用其作为除氧剂。 　　在生物转化法生产L（+）-酒石酸的工业生产过程中，容易产生草酸、琥珀酸、乳酸、苹果酸、马来酸、富马酸等杂质有机酸，对生产过程和产品纯度造成困扰。目前关于有机酸的检测受到越来越多学者的关注[1-2]。1976年Hoefler和Coggon将高效液相色谱法（HPLC）首次用于有机酸类化合物的分析。HPLC分析有机酸不仅简便快捷，而且具有选择性好、准确度高的优点[3]。根据分离机理，有机酸的HPLC可以分成离子色谱（IC）、反相高效液相色??法（RP-HPLC）和渗胶渗透色谱（GPC）三大类。然而，离子色谱对分析物的纯度要求较高，灵敏度不够高；GPC分离模式局限性较大；而RP-HPLC操作简单，对检测品要求不高，可以直接进行测定，是目前应用最广泛的有机酸检测方法[4-7]。在该分离模式中，有机酸分子直接在两相中分配，各种有机酸因分配系数不同而被分离。本研究利用高效液相色谱法，建立多种有机酸的快速检测方法，可用于生物转化法生产L（+）-酒石酸过程的质量控制。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　主要仪器与器材：高效液相色谱仪（Agilent 1260）。试剂标准品：草酸、L-酒石酸、环氧琥珀酸、L-苹果酸、马来酸、富马酸均为分析纯。甲醇为色谱纯。磷酸二氢钾、磷酸均为分析纯。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 色谱条件选择。选用的色谱柱为Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相pH值选择：20 mmol磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调pH值2.0、2.5、3.0、3.5，与甲醇以95∶5的体积比混合作为流动相；流动相流速选择：将流动相流速分别设置为0.5、0.8、1.0、1.2 mL/min；柱温的选择：柱温分别选择25、30