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pGEX―4T―1―Neurexin 1β原核表达载体构建及表达条件的优化 　　【摘 要】目的：构建Neurexin 1β（Nrx 1β）原核表达重组体。方法：以pcDNA3.1-Myc-Nrx 1β真核表达载体为模板，经PCR扩增Nrx 1β目的基因，然后将其亚克隆入pGEX-4T-1载体，构建其原核表达载体，转化入宿主菌BL21，选用IPTG进行诱导表达，优化表达条件， SDS检测Nrx 1β的蛋白表达。结果：Nrx 1β目的基因扩增成功，经克隆后成功连接至pGEX-4T-1，重组体酶切结果及测序结果与预期结果一致。转化入BL21后在IPTG的作用下成功表达，且在24°C时， IPTG浓度为0.2 mmol/L诱导12 h后Nrx 1β的蛋白表达量最高。结论：该研究成功构建了pGEX-4T-1-Nrx 1β原核表达载体，并优化了Nrx 1β的蛋白表达条件，为下一步研究该蛋白质的功能奠定基础。 　　【关键词】Neurexin 1β 原核表达载体 表达条件 　　【Abstract】Objective： To construct the prokaryotic expressing plasmid recombinant for Neurexin 1β （Nrx 1β）. Method： Nrx 1β cDNA was obtained by PCR from pcDNA3.1-Myc-Nrx 1β eukaryotic expression vector， and cloned into the pGEX-4T-1 vector. The positive prokaryotic expression vector was transformed into Escherichia coli BL21. The expression of Nrx 1β was induced by IPTG with optical condition and was detected by SDS. Result： Gene of Nrx 1β was successfully amplified， and the PCR product was ligated into pGEX-4T-1. Results of restriction enzyme digestion and sequencing were consistent with expectations. After transforming into BL21， the protein expression was successfully induced by IPTG. Conclusion： The study constructed Nrx 1β prokaryotic expressing plasmid recombinant successfully， and optimized the protein expression of Nrx 1β， which provide the foundation for studying the role of Nrx 1β in nervous system. 　　【Key words】Neurexin 1β； prokaryotic expressing vector； expression condition 　　1 引言 　　Neurexin（Nrx）是一种突触前膜蛋白，他们大多定位于突触前膜并含有一个跨膜结构域。其胞外结构域主要在突触间隙与其他蛋白质结合发挥作用，使神经元之间相互联系并形成突触[1]。在哺乳动物中，Nrx是由三个不同的基因（nrx1， 2， 3）分别由两个不同的启动子（上游α和下游β）转录为α-nrx 1-3及β-nrx 1-3，并最终翻译为Nrx 1α-3α及Nrx 1β-3β[2]。 　　Nrx最初是作为α-latrotoxin受体而被发现，α-latrotoxin与突触前受体Nrx结合并诱导大量神经递质的释放[3]。目前已报导的能与Nrxs发生相互作用的蛋白有neuroligins， leucine-rich repeat peoteins （LRRTMs）， latrophilin， neurexophilins， synaptotagmins， Cbln1-GluD2复合物等[4-9]。随着人们对Nrx的深入研究，发现Nrx与其受体相互作用后，参与细胞识别和细胞黏附，介导细胞信号转导，在突触形成及突触传递中发挥了重要作用，且通过突触的特异性影响神经网络的性能[4， 10， 11]。尽管如此，Nrx在突触发生形成和突触传递中的作用机制仍未完全阐明。因而对于Nrxs的