UPLC法测定三七总皂苷含量.docVIP

UPLC法测定三七总皂苷含量 　　摘要 〔目的〕建立超高效液相色谱法测定三七总皂苷提取物中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的含量。〔方法〕采用Ultimate XB-C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8μm）；以水（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0～4min，19%B；4～8 min，19%～35%B；8～10 min，35%～95%B；10～11 min，95%B）：检测波长为203 nm，柱温25 ℃，流速0.6 mL/min，进样量2 μL。结果：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd分别在0.006 9～0.552 0、0.028 0～2.240 0、0.003 8～0.304 0、0.297 0～2.376 0、0.007 3～0.584 0 mg/mL范围内呈良好的线性关系。平均回收率分别为98.18%、99.43%、97.26%、98.54%、99.02%。RSD分别为1.03%、0.64%、0.98%、1.37%、0.78%。〔结论〕该方法分析时间短，洗脱溶剂消耗小，方法准确，重现性好，可用于三七总皂苷提取物的质量控制。 　　关键词 UPLC法；三七总皂苷；提取物；含量 　　中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）14-0274-02 　　三七[Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen]为五加科植物，以干燥根及根茎入药，有散瘀止血、消肿止痛的功能[1]。三七总皂苷是三七的主根或根茎经加工制成的总皂苷提取物，为血塞通、血栓通等中成药的原料，对神经系统[2-4]、泌尿系统[5-6]、肝损伤[7]、肺损伤[8]等疾病有显著的疗效，已收录在《中国药典》2015年版一部中[9]。目前药典收录的方法中，其含量测定项下方法是采用常规的高效液相色谱法，即用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱，流速为1.5 mL/min。该法分析时间较长，需要60 min以上，流速较大。故存在流动相消耗大、时间消耗久、液相系统压力偏高、出来的峰型也不理想等情况。到目前为止，采用新的检测手段改善上述问题的方法鲜有报到。因此，笔者通过研究超高效液相色谱法（UPLC）来测定三七总皂苷含量的方法。结果表明，该方法分析时间大为缩短，洗脱溶剂消耗较小，可以为三七总皂苷的含量测定提供科学参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　高效液相色谱仪（美国安捷伦1290），检测器为二极管阵列检测器；色谱柱（Ultimate XB-C18柱，2.1 mm×50.0 mm，1.8 μm，月旭材料科技上海有限公司）；超声波清洗机（江苏昆山超声仪器有限公司）；电子分析天平（日本岛津）。 　　三七总皂苷对照提取物（中国食品药品检定研究院，批号：110870-201002）5种皂苷类物质含量标定为：三七皂苷R1（6.9%），人参皂苷Rg1（28%），人参皂苷Re（3.8%），人参皂苷Rb1（29.7%），人参皂苷Rd（7.3%）；甲醇（色谱纯，月旭科技）；水为重蒸馏水。 　　1.2 色谱条件 　　色谱柱（Ultimate XB-C18柱，2.1 mm×50.0 mm，1.8 μm）；检测波长为203 nm；柱温25 ℃；流速0.6 mL/min；进样量2 μL；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱。 　　1.3 溶液制备 　　1.3.1 对照提取物溶液的制备。取三七总皂苷对照提取物适量，精密称定，加70%甲醇溶解并稀释成每1 mL含2.5 mg的溶液，即得。 　　1.3.2 供试品溶液的制备。取样品25 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 　　1.4 色谱分析 　　取供试品溶液和对照提取物溶液各2 μL，按照色谱条件进行测试。 　　1.5 线性关系考察 　　分别称取三七总皂苷对照品适量，用70%甲醇溶解并稀释制成每1 mL含0.25 、0.50、1.25 、2.50、5.00、7.50、20.00 mg的溶液，按照色谱条件，分别精密吸取各浓度对照品溶液2 μL，自动进样器进样，测定峰面积，以各色谱峰峰面积（Y）对其浓度（X）进行线性回归。 　　1.6 精密度考察 　　吸取对照品溶液2 μL，按照色谱条件，自动进样器连续进样6次，进行精密度考察[10]。 　　1.7 稳定性考察 　　参照色谱条件，取制备的供试品溶液，在室温条件下放置，分别在0、1、2、4、8、12、24、36 h进样测定，记录每针样品中5种皂苷类成分的峰面积。 　　1.8 重复性考察 　　取样品6份，按照