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一株米曲霉产纤维素酶条件的优化 　　摘要 以一株实验室保存的米曲霉M1102为出发菌株，研究固态环境中碳源、氮源、初始pH值、含水量、培养温度、培养时间等因素对米曲霉产纤维素酶活力的影响。结果表明：当碳源为麸皮，氮源为豆饼粉，初始pH值为6.5，含水量为50%，培养温度为30 ℃，培养时间为60 h时，米曲霉产纤维素酶活力最高。 　　关键词 米曲霉；固态发酵；纤维素酶活 　　中图分类号 S147.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0197-02 　　Abstract The culture conditions affected the production of cellulose enzyme by Aspergillus oryzae，such as carbon source，nitrogen source，initial pH，water content，culture temperature，culture time，etc.The results showed that when the carbon source was bran，nitrogen source was powder of bean cake，initial pH value was 6.5，moisture content was 50%，culture temperature was 30 ℃，training time was 60 h，the cellulose enzyme activity produced by Aspergillus oryzae was the highest. 　　Key words Aspergillus oryzae；solid-state fermentation；cellulose enzyme activity 　　我国农作物秸秆的利用率普遍很低，多数作物秸秆都作焚烧处理，对环境的污染很大。作物秸秆中含有丰富的有机质、氮、磷、钾等作物生长所需的营养元素，如果能得到合理的利用，将会为人类带来巨大的收益。作物秸秆的处理方式有物理、化学、生物方法，其中生物降解具有污染少、能耗低等优点[1]。作物秸秆中含有丰富的纤维素，纤维素在纤维素酶的作用下可以水解生成单糖被作物和微生物利用，但纤维素不易被降解，几十年来，人们对于纤维素的预处理及酶水解过程进行了大量研究，其中纤维素酶的使用大大提高了纤维素的降解率[2]。 　　米曲霉属半知菌亚门丝孢纲丝孢目从梗孢科曲霉属真菌中的一个常见种。米曲霉（Aspergillus oryzae）是纤维素酶的主要生产菌种之一。工业用米曲霉菌种所产的酶系较多、酶系组成较复杂[3]，国内对该菌株的相关研究并不多，对其酶系在工业发酵过程中受到的影响因素及其作用机理并不十分了解，从而导致在工业生产过程中不能够十分精确地控制米曲霉的产酶过程，限制了这一传统的食用菌株在工业应用领域的进一步拓展[4]。本试验对米曲霉M1102产纤维素酶在固体发酵过程中所受的影响及活性变化进行了研究，以期为米曲霉产纤维素酶的工业化生产提供相关的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　1.1.1 菌种。米曲霉菌株M1102，来自中国菌种保藏中心。 　　1.1.2 培养基与主要试剂。斜面培养基：土豆培养基（PDA）；液体种子培养基：豆饼粉5 g/L，蛋白胨5 g/L，蔗糖10 g/L，MgSO4 0.3 g/L，K2HPO4 0.3 g/L，调节pH值至7.0；营养盐溶液：NaCl 2 g/L、KH2PO4 1.5 g/L、CaCO3 0.5 g/L、MgSO4 0.5 g/L，调节 pH值至7.0；固体培养基：木质纤维素培养基；主要试剂：麸皮、稻壳粉、玉米粉、玉米芯粉、葡萄糖、蔗糖、豆饼粉、干酪素、蛋白胨、硫酸铵、尿素。 　　1.1.3 仪器设备。酒精灯、接种环、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、pH测定仪、紫外分光光度计、水浴锅、恒温培养箱、电子天平、控温摇床。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 培养方法。一是米曲霉种子液制备：将米曲霉接种于PDA斜面上进行活化，用接种环挑取一环接种于250 mL三角瓶的种子液中，装液量为50 mL，30 ℃，180 r/min，培养24 h。二是固体培养：在250 mL三角瓶中加入10 g风干后过筛的木质纤维原料和5 mL营养盐溶液，拌匀，121 ℃灭菌30 min，冷却后将种子液以3%的接种量接种于固体培养基中，32 ℃下培养60 h，测定其产纤维素酶活[5]。粗酶液的制备：每1g固态培养物加入磷酸缓冲溶液5.0 mL（pH值 7.2），室温下浸提1 h，10 000 r/min离心10 min