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一株野生侧耳属菌株的分离鉴定与生物学特性 　　摘 要：采用组织分离的方法从野生侧耳属菌株（Pleurotu ssp.）子实体上分离得到菌株XZG-ts，以其基因组为模板扩增获得该菌株的ITS序列，序列分析结果表明，菌株XZG-ts与GenBank中来自于澳大利亚、印度和中国云南的3个肺形侧耳菌株聚为一簇，组内核苷酸一致率为100%，而与侧耳属其他4个种的10个菌株核苷酸一致率为98.10%～99.06%，依此结果将XZG-ts菌株鉴定为P. pulmonarius。进一步研究了不同碳源、氮源、碳氮组合、温度及pH值对菌株XZG-ts菌丝生长的影响，结果表明，最适碳源为果糖，氮源为酵母膏，最佳碳氮源组合为果糖1%、麦芽糖1.0%、酵母膏0.2%、蛋白胨0.3%，最适生长温度为25℃，最适pH值为6。 　　关键词：侧耳属菌株；ITS序列分析；生物学特性；肺形侧耳 　　中图分类号：S646.9文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）12-0091-04 　　Abstract A fungi strain， XZG-ts， collected from the Mountain Tai， was isolated by tissue isolation and the internal transcribed spacers （ITS） was amplified by PCR. In the phylogenetic tree constructed with ITS， XZG-ts formed a branch with 3 isolates belonging to Pleurotus pulmonarius from Australian， India and China with the consistent rate of 100% in intra-group nucleotide. While it was only 98.10%～99.06% with other 10 isolates of Pleurotus. Therefore XZG-ts was identified as P. pulmonarius. The effects of carbon source， nitrogen source， carbon-nitrogen combination and pH value on the growth of mycelium were further studied. The results showed the optimum carbon source， nitrogen source， temperature and pH value was fructose， yeast extract， 25℃ and 6， respectively. And the optimum carbon-nitrogen combination was 1% fructose， 1.0% maltose， 0.2% yeast extract， 0.3% peptone. 　　Keywords Pleurotus sp.； ITS sequence analysis； Biological characteristic； Pleurotus pulmonarius 　　侧耳属[Pleurotus （Fr.） P. Kumm.]是与人类关系密切的重要经济真菌，世界广泛存在20 种[1]，对木质纤维素的转化以及环境修复作用倍受关注[2]。近200年来，侧耳属描述的分类单元超过1 000 个[3]，主要原因是子实体形态受环境条件影响大，按照形态特征分类导致较多的同物异名或同名异物。我国侧耳属真菌野生资源丰富，分布范围也极其广泛。本研究从泰山分离获得一株野生侧耳属菌株，对其进行鉴定，并研究明确了该菌株菌丝体最适培养条件，为产业发展和教学科研提供了新的种质资源，同时为进一步开发利用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试菌株 　　将采自泰山的野生侧耳属菌株参照文献[4]进行组织分离、纯化，标为XZG-ts。 　　1.2 主要试剂 　　真菌总DNA提取试剂盒（E.Z.N.A. Fungal DNA Kit），购自北京全式金公司；PCR所用试剂，均为大连宝生物公司产品；常规试剂，为进口分装或国产分析纯试剂。 　　1.3 菌株的分子鉴定 　　1.3.1 菌丝体制备及DNA提取 将保存的母种切取5 mm2小块，接种于PDA加富平板培养基中央，25℃黑暗培养5～7 d，待菌丝生长到接近平板边缘，刮取菌落边缘的新鲜菌丝，利用真菌总DNA提取试剂盒提取基因组总DNA。 　　1.3